無論是學術大牛還是科研小白，在接觸一個新課題時，往往是三個步驟：首先，閱讀大量相關文獻，設計出自己的實驗方案。然后，摸索預實驗，獲得一些經驗和數據。根據這些資料，決定是否推進正式試驗。其中，很重要的預實驗不僅能節約實驗經費，減少人力物力支出，重要的是，能讓你在做正式試驗時「手兒不抖，穩如老狗」。因此，給大家分享一下如何摸索自己的預實驗。首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給藥劑量就要增加，不僅多花錢，并且還容易影響實驗效果。筆者曾經提前將實驗動物買回，但因為特殊原因沒能購買到造模藥物，只能忍痛割愛將動物贈送他人，白白虧了一筆血汗錢（那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖，沒辦法用作造模）。動物及試劑購買首先需要考慮：實驗動物品種、體重、性別、周齡（通常根據既往文獻報道可以獲得答案）、數量（需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物本身會打架互毆，因此需要提前購買足夠的動物）。代謝疾病模型構建，模擬糖尿病、肥胖等代謝性疾病，為研究發病機制與干預策略提供平臺。專業科研技術服務平臺

    原代細胞是指在機體或組織中直接從生物體分離出來的、未經傳代培養的細胞。這種細胞保持著其原始的生物學特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境，但是仍然保持著其基本的生物學特性，包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下，保持著其原始的生物學特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時，由于原代細胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫學中，如皮膚移植、骨頭修復和神經再生等。此外，原代細胞模型在疾病研究中也扮演著重要角色。由于原代細胞具有更高的生物真實性，使用它們建立的疾病模型能夠更準確地模擬疾病的發展過程和藥物的作用機制，從而為新藥研發和疾病治、療提供更有效的工具。總之，原代細胞是一種具有高度活性和分裂能力的細胞，在生物醫學研究中具有重要的作用。由于其原始的生物學特性。青海口碑好的科研技術服務優化生物樣本質量控制與標準化，確保樣本收集、處理過程符合科研標準，提高數據可靠性。

    4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養有細胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜。抗體以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經試驗而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標記方法免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內兩種蛋白質分子，當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明。此方法稍微復雜一些，應注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發射光不應重疊，且盡量遠離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強時，應考慮先孵育顏色較弱的二抗。

    基因敲除細胞構建基因敲除細胞構建服務（DH0009）一、服務介紹1、從靶點篩選到細胞株構建一站式服務。2、采用慢病毒系統構建，基因整合穩定。3、保證干擾效率大于80%（以RT-PCR檢測靶基因mRNA表達結果為依據）。4、根據您的需要可以提供經濟實惠的多克隆細胞系或者的單克隆細胞系。具體細胞系選擇請見相關介紹二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0009-1CRISPR/Cas9基因敲除咨詢咨詢DH0009-2sh細胞敲除構建咨詢咨詢DH0009-3其它三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態良好的細胞株及其他專門的實驗材料2.干擾靶基因GeneID或mRNA序列。3.目的基因功能相關參考文獻及其他您認為有參考價值的資料。4.實驗前，客戶需告知具體的細胞處理方式及詳細要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。四、服務流程1.載體構建、2.靶點篩選、3.干擾效率驗證4.穩定細胞篩選和克隆5.撰寫實驗報告五、提交給客戶結果1、完整實驗報告內容：2、慢病毒載體構建報告及測序結果；3、干擾靶點篩選報告；4、穩定細胞系篩選實驗報告5、已構建慢病毒RNA干擾載體；6、多克隆細胞系構建服務提供目的基因敲減細胞株及表達對照細胞株各一株。轉化醫學研究，橋接基礎研究與臨床應用，加速科研成果向臨床實踐的轉化。

    日久天長，易發生如下變化：分化現象減弱；形態功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此，培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養后，這種差異就開始發生了。問什么是無血清培養基？與普通培養基有什么區別？答：無血清培養基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。添加組分可能包括纖連蛋白、層粘連蛋白等貼壁因子、胰島素、轉鐵蛋白、硒等。問細胞培養基偶然被凍，可否繼續使用？答：如果細胞培養基偶然被凍，您應該自然溶解培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生，培養基可以正常使用，如果出現沉淀，只能丟棄這些培養基。問培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎？答：大部分添加物和試劑多可以凍融3次，如果次數過多會將使含有的蛋發生降解和沉淀，這將會影響它的性能。單細胞測序技術，實現對單個細胞基因表達譜的精細描繪，揭示細胞異質性，助力腫瘤免疫等復雜疾病研究。貴州專業科研技術服務平臺

生物藥物開發與優化，涵蓋抗體藥物、疫苗等，通過高通量篩選、結構生物學等手段，提升藥物效力與安全性。專業科研技術服務平臺

    搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ulTritonX-100細胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；染色反應液組分500ul1ml2ml5mlIX反應緩沖液430ul860ulmlml催化劑溶液20ul40ul80ul200ulTAMRA紅色熒光溶液ulul5ulul緩沖添加劑50ul100ul200ul500ul(d)每孔加入100ul配置好的檢測混合液，以覆蓋細胞為宜，避光、室溫孵育30分鐘。(e)棄染色反應液，加入300ulTritonX-100細胞滲透液清洗2-3次，每次10分鐘；(f)棄細胞滲透液，用PBS洗兩次，每次5分鐘。DNA染色(a)將Hoechst33342用PBS溶液1:1000進行稀釋得到終濃度為5ug/ml的lxHoechst染色液；(b)每孔加入300ul1xHoechst染色液，室溫避光孵育20-30分鐘后，棄染色液；(c)每孔加入300ulPBS洗細胞兩次，去掉洗液。專業科研技術服務平臺