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染方法大致可分為物理介導（如電穿孔法、顯微注射和基因等）、化學介導（脂質體及其代替物、磷酸鈣等）和生物介導（各類病毒，包括腺病毒、慢病毒、逆轉錄病毒、腺相關病毒等）三類途徑。細胞轉染又分為瞬時轉染和穩定轉染，瞬時轉染是指外源基因進入受體細胞后，存在于游離的載體上，不整合到細胞的染色體上，基因表達維持時間較短，通常在96h以內；穩定轉染是指DNA整合到宿主細胞的染色體中，使宿主細胞可長期表達目的基因。目前，大多采用依據不同質粒載體含有的抗性標志選用相應的對靶細胞進行篩選，常用的有嘌呤霉素（Puromycin）、G418（Geneticin）等。1、主要有下面幾種化學法：磷酸鈣法、DEAE...

這些就需要根據各自的特殊項目而制定針對性的培養條件了。下面我們以實驗室常見的DMEM和1640為例，來介紹它們之間的不同之處。DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一種廣泛應用的細胞培養基之一，它是由Eagle于1959年開發出來的，后由Dulbecco進行了改良。DMEM主要適用于肝臟、腎臟、肺、心臟等多種類型的哺乳動物細胞系的培養。DMEM中含有較高濃度的葡萄糖（4500mg/L）、氨基酸、維生素和微量元素等營養物質。此外，DMEM還添加了酸和乳酸等緩沖劑，能夠保持細胞在較寬的pH范圍內正常生長。RPMI-1640(RoswellParkMem...

原代細胞是指在機體或組織中直接從生物體分離出來的、未經傳代培養的細胞。這種細胞保持著其原始的生物學特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境，但是仍然保持著其基本的生物學特性，包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下，保持著其原始的生物學特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時，由于原代細胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫學中，如...

隨著社會的發展，身體健康成為民生重點關注熱點，從人體上看疾病遠遠不能確定病情的癥狀及疾病的醫療。所以我們可以通過動物疾病模型，去實現醫學的理念。一些手術動物模型可以讓我們更好地去觀察以及防治某些疾病；例如：大鼠1/2切腎，可模擬臨床單邊腎功能缺失疾病模型大鼠1/2切腎，可模擬臨床單邊腎功能缺失疾病模型。大鼠在進入動物房一周后，等其適應環境再開始實驗。麻醉，備皮，側背部開口，結扎腎蒂，剪除腎臟，若無出血即為手術成功；層層縫合等其蘇醒即可。1/2切除大鼠腎臟會在病程初期呈現出較強代償性作用，但代償性并不能滿足機體需要，后期腎臟依然會持續惡化，在防御與醫療過程中可采取相關措施，從而達到有效的...

使其形成利于核酸進入的微孔。C.逆轉錄病毒（RNA）：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用進入宿主細胞，之后反轉錄酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中。特點：穩定轉染，可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等，但攜帶基因不能太大。D.腺病毒（雙鏈DNA）：先和細胞表面的受體結合，繼而在αV整合素介導下被細胞內吞。特點：可用于難轉染的細胞。2、影響轉染的因素血清：血清影響復合物的形成，降低轉染效率。陽離子脂質體和DNA的量在使用血清時會有所不同，因此想在轉染培養基中加入血清時要進行條件優化。大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康。比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培...

客戶需告知具體的細胞處理方式及詳細要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。四、服務流程瞬轉穩轉導入的DNA沒有整合到基因組中，而是保留在細胞核上導入的DNA整合到基因組中導入的遺傳物質不傳遞到子代；遺傳改變只是暫時的導入的遺傳物質能夠代代相傳；遺傳改變是**的不需要選擇性篩選需要選擇性篩選出穩定轉染的細胞DNA載體和RNA都可用于瞬時轉染只有DNA載體可用于穩定轉染；RNA本身不能穩定地導入細胞中導入的遺傳物質的高拷貝數導致高水平的蛋白質表達。單拷貝數或低拷貝數的穩定整合的DNA導致較低水平的蛋白質表達。通常在轉染后24-96小時內收獲細胞。需要2-...

使其形成利于核酸進入的微孔。C.逆轉錄病毒（RNA）：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細胞表面的受體相互作用進入宿主細胞，之后反轉錄酶啟動合成DNA并隨機整合到宿主基因組中。特點：穩定轉染，可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等，但攜帶基因不能太大。D.腺病毒（雙鏈DNA）：先和細胞表面的受體結合，繼而在αV整合素介導下被細胞內吞。特點：可用于難轉染的細胞。2、影響轉染的因素血清：血清影響復合物的形成，降低轉染效率。陽離子脂質體和DNA的量在使用血清時會有所不同，因此想在轉染培養基中加入血清時要進行條件優化。大部分細胞可以在無血清培養基中幾個小時內保持健康。比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培...

基因敲除細胞構建基因敲除細胞構建服務（DH0009）一、服務介紹1、從靶點篩選到細胞株構建一站式服務。2、采用慢病毒系統構建，基因整合穩定。3、保證干擾效率大于80%（以RT-PCR檢測靶基因mRNA表達結果為依據）。4、根據您的需要可以提供經濟實惠的多克隆細胞系或者的單克隆細胞系。具體細胞系選擇請見相關介紹二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0009-1CRISPR/Cas9基因敲除咨詢咨詢DH0009-2sh細胞敲除構建咨詢咨詢DH0009-3其它三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態良好的細胞株及其他專門的實驗材料2.干擾靶基因GeneID或mRNA序列。...

免疫熒光技術服務免疫熒光技術服務（DH0014）一、服務介紹免疫熒光技術（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展*早的一種。將抗原或抗體用熒光素進行標記，標記的抗原或標記的抗體與相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術稱為免疫熒光素技術。免疫熒光細胞化學分直接法、夾心法、間接法和補體法。二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0014-01免疫熒光單標記檢測咨詢咨詢DH0014-02免疫熒光雙標記檢測咨詢咨詢三、客戶提供1、細胞株或細胞爬片。注：細胞爬片不宜太密；2、熒光檢測所用的抗體3、...

使每條染色體的著絲點排列在細胞中間的一個平面上。這個平面與紡錘體的中軸相垂直，類似于地球上赤道的位置，所以叫做赤道板。分裂中期的細胞，染色體的形態比較固定，數目比較清晰，便于觀察清楚。后期細胞分裂的后期，每一個著絲點分裂成兩個，原來連接在同一個著絲點上的兩條姐妹染色單體也隨著分離開來，成為兩條子染色體。紡錘絲牽引著子染色體分別向細胞的兩極，使細胞的兩極各有一套染色體。這兩套染色體的形態和數目是完全相同的，每一套染色體與分裂以前的親代細胞中的染色體的形態和數目是相同的。末期當這兩套染色體別到達細胞的兩極以后，每條染色體的形態發生變化，又逐漸變成細長而盤曲的絲。同時，紡錘絲逐漸消失，出現新...

無論是學術大牛還是科研小白，在接觸一個新課題時，往往是三個步驟：首先，閱讀大量相關文獻，設計出自己的實驗方案。然后，摸索預實驗，獲得一些經驗和數據。根據這些資料，決定是否推進正式試驗。其中，很重要的預實驗不僅能節約實驗經費，減少人力物力支出，重要的是，能讓你在做正式試驗時「手兒不抖，穩如老狗」。因此，給大家分享一下如何摸索自己的預實驗。首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給...

日久天長，易發生如下變化：分化現象減弱；形態功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此，培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養后，這種差異就開始發生了。問什么是無血清培養基？與普通培養基有什么區別？答：無血清培養基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。添加組分可...

細胞增殖是生活細胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征。細胞增殖是生物體生長、發育、繁殖以及遺傳的基礎。真核生物的分裂依據過程不同有三種方式，有有絲分裂，無絲分裂，減數分裂。上海東寰為您分享有絲分裂的周期變化。有絲分裂的周期變化細胞分裂期在細胞分裂期，很明顯變化是細胞核中染色體的變化。人們為了研究方便，把分裂期分為四個時期：前期，中期，后期，末期。其實，分裂期的各個時期的變化是連續的，并沒有嚴格的時期界限。前期細胞分裂的前期，很明顯的變化是細胞核中出現染色體。分裂間期復制的染色體，由于螺旋纏繞在一起，逐漸縮短變粗，形態越來越清楚。在光學顯微鏡下觀察這個時期的細胞,可以看到每一條染...

干細胞誘導分化技術服務干細胞誘導分化技術服務（DH0008）一、服務介紹自我更新能力和多向分化能力是干細胞的兩個基本特征。干細胞的誘導分化一方面是干細胞鑒定的主要方法，另一方面也是干細胞功能學研究的主要途徑。依賴于成熟的干細胞技術平臺，上海東寰生物可以開展多種干細胞分化潛能研究的實驗服務二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0008-1誘導成骨分化咨詢咨詢DH0008-2誘導成脂分化咨詢咨詢DH0008-3誘導成軟骨分化咨詢咨詢三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態良好的細胞株及其他專門（處理細胞）實驗材料；（若客戶需要采購其它檢測試劑盒需提前告知）2.實驗前，客...

細胞活力及毒性檢測細胞活力檢測技術服務（DH0005）一、服務介紹在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力。為了以下實驗，我們需要對細胞做活力檢測。1、由組織中分離細胞檢測細胞活力以了解分離過程對細胞是否有損傷作用2、復蘇后的細胞也要檢測細胞活力，了解凍存和復蘇的效果3、藥物篩選等檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK-8法甲瓚產物的水溶性差（需加有機溶劑溶解）好好好檢測靈敏度高很高很高非常高檢測時間較長較短較短短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細胞毒性高，細胞形態完全消失很低，細胞形態不變很...

動物模型技術服務大類技術名稱價格動物培養相關實驗動物購買：C57小鼠37元/只實驗動物購買：Balbc裸鼠137元/只實驗動物購買：Balbc裸鼠43元/只實驗動物飼養：大鼠4元/天/只實驗動物飼養：小鼠2元/天/只實驗動物造模：大、小鼠見下冊心血管系統心梗模型625/562/只（大、小鼠）心肌肥厚模型625/562/只（大、小鼠）主動脈損傷模型625/562/只（大、小鼠）主動脈弓縮窄致心衰模型625/562/只（大、小鼠）頸動脈球囊損傷模型625/562/只（大、小鼠）頸動脈結扎致******模型625/562/只（大、小鼠）栓線法腦缺血MACO模型625/562/只（大、小鼠）膿...

細胞鑒定服務細胞鑒定服務（DH0007）一、服務介紹為了后續實驗成功進行，我們對分離培養的細胞做一個細胞鑒定實驗。細胞鑒定實驗包括形態學鑒定、免疫組織細胞化學鑒定（免疫熒光化學鑒定）、流式細胞儀鑒定二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0007-1免疫組織細胞化學鑒定（免疫熒光化學鑒定）100元/片/指標7-10DH0007-2流式細胞儀鑒定200元/樣本7-10三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態良好的細胞株及其他用于實驗材料，如藥物、質粒、病毒、相關抗體等；（若客戶需要采購其它檢測試劑盒需提前告知）2.提供的生物材料中攜帶熒光，請務必告知3.實驗前，客戶需告...

防止有Matrigel流經上孔而留下殘留膠；3、需要按照細胞的生長速度定時采集圖像，并且對其成管長度、覆蓋面積、成環數和結點進行測量和記錄，并且對其進行統計分析；4、分上下孔的ibidi血管生成載玻片能去除凹液面，使成像效果更好。（Matrigel鋪在下孔，細胞鋪在Matrigel上，上孔充滿培養基）2、數據分析（在特定的時間點采集圖片，并且進行圖像分析（Wimasis全自動分析）測量小管長度，成環數，細胞覆蓋面積和結點。之后在對測量結果進行統計分析以說明實驗結果。）三、實驗具體步驟1、準備基質膠1）實驗前一天將Matrigel置于冰盒中，放入4度冰箱，使膠能過夜緩慢融化。（注意：同樣...

如何判斷是否加入了合適體積的Matrigel：我們只需用一張格子紙就能知道自己的移液調整到多少能正好把下孔填滿。如上圖所示，垂直透過每個孔看下面的格子紙，如果格子被縮小了，那么就說明膠沒加滿，格子被放大了，那么膠就加多了，格子沒發生什么變形，這才是剛剛加滿下孔的狀態。2、凝膠1）蓋上ibidi血管生成載玻片的蓋子。2）準備一個10cm的培養皿，放入浸過水的紙巾，制成一個濕盒。3）將ibidi血管生成載玻片放入培養皿中，蓋上培養皿蓋。4）將整個培養皿放入培養箱中，靜置30分鐘左右，等待膠凝結。5）等待同時準備細胞懸液。3.鋪細胞加入細胞的量直接影響實驗結果，所以在正式實驗開始之前，要對不...

這些就需要根據各自的特殊項目而制定針對性的培養條件了。下面我們以實驗室常見的DMEM和1640為例，來介紹它們之間的不同之處。DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一種廣泛應用的細胞培養基之一，它是由Eagle于1959年開發出來的，后由Dulbecco進行了改良。DMEM主要適用于肝臟、腎臟、肺、心臟等多種類型的哺乳動物細胞系的培養。DMEM中含有較高濃度的葡萄糖（4500mg/L）、氨基酸、維生素和微量元素等營養物質。此外，DMEM還添加了酸和乳酸等緩沖劑，能夠保持細胞在較寬的pH范圍內正常生長。RPMI-1640(RoswellParkMem...

ng）=×片段堿基對數（單片段）；適片段用量（ng）=×片段堿基對數（多片段）。注1：單片段重組反應，若單個插入片段的長度大于載體，則應將載體與插入片段的計算公式互換；注2：單片段重組反應，若單個插入片段的長度小于200bp，則插入片段應使用5倍的用量；注3：多片段重組反應，各個插入片段的用量應不少于10ng，使用上述公式計算適使用量低于此值時，直接使用10ng；注4：若按上述公式計算出的線性化載體用量低于50ng或高于200ng，建議按50ng或200ng用量使用；注5：線性化載體過長，插入片段過長或片段數過多，克隆陽性率均會降低。2、體系反應；1、配制完成后，用移液器輕輕吸打混勻各...

也可以挑去單克隆細胞株進行進一步培養，以得到滿意的穩定表達目的基因的細胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測目的基因的表達量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細胞株：a.正常細胞株；b.空載病毒載體的細胞株；c.過表達目的基因的病毒載體的細胞。8)在后續培養傳代該穩轉細胞株時，培養基中需添加低濃度Puromycin做壓力篩選條件。注意事項1.為避免慢病毒后細胞死亡，務必保證原始細胞無支原體污染。2.查閱壓力篩選條件在目標細胞系中穩轉株篩選的致死用量信息。3.查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的滴度。4.轉染后可以進一步進行單克隆穩轉株培養，可采用稀釋法和培養...

流水線作業，這樣能節省時間，并且能保證樣品的質量。如果請人，每個人需要負責哪一板塊的工作，比如誰負責麻醉，誰負責取血液，誰負責取，誰負責拍照、誰負責儲存，都需要提前規劃交代清楚。實驗指標檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎后，再向老師、師兄師姐學習經驗和技術，如果實驗平臺的儀器需要提前預約，建議提前規劃好使用的時間。反復總結尋找答案在整個預實驗的過程中可能會出現很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當、腹腔注射操作失誤、物使用不當等引起動物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解...

細胞活力及毒性檢測細胞活力檢測技術服務（DH0005）一、服務介紹在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力。為了以下實驗，我們需要對細胞做活力檢測。1、由組織中分離細胞檢測細胞活力以了解分離過程對細胞是否有損傷作用2、復蘇后的細胞也要檢測細胞活力，了解凍存和復蘇的效果3、藥物篩選等檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK-8法甲瓚產物的水溶性差（需加有機溶劑溶解）好好好檢測靈敏度高很高很高非常高檢測時間較長較短較短短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細胞毒性高，細胞形態完全消失很低，細胞形態不變很...

如發生與發展、抗原呈遞、免疫調節、組織愈合等。此外，外泌體與疾病的研究表明：外泌體可能在代謝性疾病的出現以及心血管健康中發揮作用。外泌體生物發生和神經元細胞中分泌小泡的調節之間的交集為外泌體和神經退行性疾病的發病機制之間假定的聯系提供了新的見解。與研究外泌體在其他疾病中的作用相比，外泌體在中的研究進展迅速，而且外泌體與的幾個主要特征有關。外泌體影響生長和轉移、綜合征和耐藥性。外泌體在進展中的作用可能是動態的，并且與的類型、遺傳學和分期有關。外泌體的應用外泌體用于免疫基于免疫細胞來源的外泌體能夠介導和調節機體對的免疫反應，外泌體在免疫方面的潛力受到關注。其中樹枝狀細胞產生的外泌體包含大量...

然后將感興趣的藥物通過電穿孔或脂質體轉染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內可裝載的藥物包括小分子化學藥物、蛋白質和多肽、核酸藥物、天然產物等。外泌體的抑制作用外泌體水平升高通常與不同類型的惡化相關，一些研究人員希望能通過降低外泌體到正常水平來防止不良預后。從這個角度出發，許多正在進行的研究旨在通過調節外泌體生成分泌的過程或通過特異性靶向其成分抑制其與靶細胞的相互作用來調節外泌體的產生。如今我們對外泌體機制和不同生理和病理條件下的功能的理解呈指數級增長，雖然目前其生物學功能還未完全解析清楚，但研究者們在許多領域均已對其進行了深入探索。外泌體不是廢物顆粒，而是細胞間通訊的關鍵介質，作為宿主細...

前幾個循環的退火溫度設定為，比引物的退火溫度（Tm）再高幾度。較高的退火溫度能有效減少非特異性擴增，但同時較高的退火溫度會加劇引物與目標序列的分離，導致PCR的產量降低。因此在開始的幾個循環中，退火溫度通常設置為每個循環降低1℃，以增加體系中目的基因的含量。當退火溫度降低到溫度時，剩余循環都維持此退火溫度。通過這種方法，在PCR過程中，所期望的PCR產物得到有選擇性的增加，而幾乎不會出現非特異性的產物。注：通過以較高的溫度起始，再隨著循環逐漸降低到退火溫度（黑色曲線），這種PCR方法可提升反應特異性（黃色曲線）。目標擴增子的產量（綠色曲線）相應的得到富集。7、直接PCR直接PCR是指直...

血管生長是發生的關鍵步驟。無論原發性還是繼發性，一旦生長直徑超過1~2mm，都會有血管生成，這是由于細胞自身可分泌多種生長因子，誘導血管生成。由于組織這種新生血管結構及功能異常，且血管基質不完善，這種微血管容易發生滲漏，因此細胞不需經過復雜的侵襲過程而直接穿透到血管內進入血流并在遠隔部位形成轉移。越來越多的研究表明，良性血管生成稀少，血管生長緩慢；而大多數惡性的血管生成密集且生長迅速，因此，血管生成在的發展轉移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止組織的發展和擴散轉移。血管生成實驗的技術原理主要是應用Matrigel模擬機體環境，上面接種細胞，觀察血管生成情況。體外的血管生成實驗...

D-Efs1875元大鼠胃底平滑肌細胞SD-GFSMCs1875元大鼠胃竇平滑肌細胞SD-GASMCs1875元大鼠結腸平滑肌細胞SD-CSMCs1875元大鼠結腸成纖維細胞SD-CFCs1875元大鼠肝實質細胞SD-HPs2750元大鼠腎小管上皮細胞SD-RTECs3750元大鼠輸精管成纖維細胞SD-VDFs1875元大鼠**海綿體平滑肌細胞SD-PCMSCs1875元大鼠**海綿體成纖維細胞SD-PCFs1875元大鼠睪丸支持細胞SD-TSCs2500元大鼠關節軟骨細胞SD-ACCs2250元大鼠骨骼肌細胞SD-SkMCs1875元大鼠骨髓內皮祖細胞SD-EPCs3125元大鼠骨髓...

實時熒光定量pCR技術服務實時熒光定量PCR技術服務（DH1002）一.服務內容1、引物設計：客戶提供目的基因序列，我們可為客戶設計引物。2、RNA提取：從人或動物細胞、組織等樣品中提取RNA樣品。3、逆轉錄：對樣品中RNA反轉錄成cDNA。4、實時熒光定量pCR檢測（1）按體系加樣（2）設定程序實時熒光定量pCR（3）pCR鑒定（4）數據導出5、進行內參檢測。6、預實驗及正式實驗服務。二.樣品要求1、細胞＞1×10^7；組織＞50mg；細菌濕重＞1mg等。2、樣品RNA濃度＞100ng/ml或cDNA樣本>5ug。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。...