1、PCRPCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶鏈式反應，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，體系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、擴增增強因子，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程，能快速特異地在體外擴增任何目的DNA。5、巢式PCR巢式PCR（NestedPCR）是指利用兩套PCR引物進行兩輪PCR擴增，第二輪的擴增產物才是目的基因片段。如果對引物（外引物）的錯配導致非特異性產物被擴增，相同的非特異性區域被第二對引物識別并繼續擴增的可能性非常小，所以通過第二對引物的擴增，PCR的特異性得到了提升。進行兩輪PCR的一個優勢在于：有助于從有限的起始DNA中擴增得到足量的產物。巢式PCR的實驗原理為根據DNA模板序列設計兩對引物，利用對引物（稱為外引物）對靶DNA進行15-30個循環的標準擴增；輪擴增結束后將一小部分起始擴增產物稀釋100-1000倍加入到第二輪擴增體系中作為模板，利用第二對引物（稱為內引物或巢式引物，結合在輪PCR產物的內部，進行15-30個循環的擴增，第二輪PCR的擴增片段短于輪。6、降落PCR降落PCR（TouchdownPCR）是一種通過調整PCR循環參數，提升PCR反應特異性的方法。在降落PCR中。細胞療愈產品開發，包括CAR-T細胞、NK細胞等，針對免疫缺陷疾病提供創新療法。北京怎樣科研技術服務GPM實驗室

    具有高合成能力的DNA聚合酶可以耐受這些抑制劑，從而使直接PCR成為可能。具有高合成能力的聚合酶通常具有更高靈敏度，因此可從未純化樣本中擴增微量的DNA。8、重疊延伸PCR重疊延伸PCR技術(genesplicingbyoverlapextensionPCR，SOEPCR)，是采用具有互補末端的引物，使PCR產物形成了重疊鏈，從而在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸，將不同來源的擴增片段重疊拼接起來的技術。這項技術目前主要有兩個應用方向：構建融合基因；基因定點突變。9、反向PCR反向PCR（InversePCR,IPCR）是用反向的互補引物來擴增兩引物以外的DNA片段，對某個已知DNA片段兩側的末知序列進行擴增。反向PCR設計之初是為了用于確定鄰近未知區域的序列，多用于研究基因的啟動子序列；致性染色體重排，如基因融合、易位和轉座；以及病毒基因整合，現在也常用于定點突變，復制一個具有預期突變的質粒。反向PCR流程，首先對模板進行限制性酶切消化和連接，選定的限制性內切酶不可剪切已知序列，從而使連接發生于側翼未知序列之間。使用低濃度的酶切DNA片段優化連接步驟，使其傾向于自我連接而非多片段連接（即形成連環體）。完成自我連接后，從DNA的已知區域啟動反向PCR。西藏本地科研技術服務平臺心血管功能評估系統，利用無創技術監測心臟結構與功能，評估心血管疾病風險與療愈效果。

    細胞活力及毒性檢測細胞活力檢測技術服務（DH0005）一、服務介紹在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力。為了以下實驗，我們需要對細胞做活力檢測。1、由組織中分離細胞檢測細胞活力以了解分離過程對細胞是否有損傷作用2、復蘇后的細胞也要檢測細胞活力，了解凍存和復蘇的效果3、藥物篩選等檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK-8法甲瓚產物的水溶性差（需加有機溶劑溶解）好好好檢測靈敏度高很高很高非常高檢測時間較長較短較短短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細胞毒性高，細胞形態完全消失很低，細胞形態不變很低，細胞形態不變很低，細胞形態不變試劑穩定性一般較差一般很好批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0005-1MTT細胞活力檢測100元/樣本7-10DH0005-2CCK-8細胞活力檢測試劑盒100元/樣本7-10DH0005-3Live/Dead細胞活力檢測咨詢咨詢三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態良好的細胞株及其他用于實驗材料，如藥物、質粒、病毒等；（若客戶需要采購其它檢測試劑盒需提前告知）2.提供的生物材料中攜帶熒光。

    免疫沉淀（IP/ChIP）免疫沉淀（IP/ChIP）技術服務(DH1005)一.服務內容1、蛋白提取及沉淀處理：從人或動物細胞、組織，細胞等樣品中提取蛋白樣品。2、蛋白定量：對樣品中蛋白進行半定量分析。3、WesternBlot檢測（1）電泳：聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白樣品。（2）濕法轉印。（3）雜交：用抗體鑒定膜上的特定蛋白。（4）顯色：ECL熒光顯色，黑條帶白背景照片4、進行蛋白內參檢測（所有內參抗體均不收取費用）。5、預實驗及正式實驗服務。二.樣品要求1、細胞＞1×10^7；組織＞30mg；細菌濕重＞1mg等。2、樣品蛋白濃度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣品。3、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白、有陽性表達的細胞或組織、商品化的陽性對照產品等）作為陽性對照。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。三.收費標準服務項目免疫學檢測服務內容周期產物/報告價格（元）01免疫沉淀（IP/ChIP）客戶提供樣本和抗體雙方商定方案咨詢完整實驗報告咨詢02免疫沉淀（IP)客戶提供樣本和抗體雙方商定方案咨詢完整實驗報告咨詢四、客戶提供材料1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關的必要資料（具有保密性的材料除外）。動物模型構建服務，根據研究需求定制疾病模型，如心血管疾病等，為藥物篩選和功能驗證提供可靠平臺。

    1.分子雜交與印跡技術（1）探針是經過特殊標記，能與待測單鏈核酸分子互補結合的已知核酸片段（2）印跡是將電泳分離后的大分子轉印到硝酸纖維素膜上，以便雜交的技術（3）DNA印跡：Southernblotting，用于檢測基因組DNA（4）RNA印跡：Northernblotting，主要用來檢測mRNA的表達水平（5）蛋白質印跡：Westernblotting，用于檢測蛋白質的水平（1）反應體系：單鏈DNA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。（2）反應步驟：變性、復性、延伸（3）逆轉錄PCR：即RT-PCR，在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發研究基因表達或獲得目的基因的方法。（4）應用：目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴增、DNA序列測定、基因突變分析3.蛋白質相互作用研究酵母雙雜交技術、（EMSA）、染色質免疫沉淀技術（ChIP）5.基因敲除即geneknock-out，通過同源基因重組原理使得某個基因活性喪失。免疫細胞功能評估，通過體外實驗評估T細胞、B細胞等免疫功能，指導免疫療愈策略。吉林本地科研技術服務

醫學圖像處理與分析，運用深度學習技術，對醫學影像進行自動分割、分類，輔助臨床決策。北京怎樣科研技術服務GPM實驗室

    防止有Matrigel流經上孔而留下殘留膠；3、需要按照細胞的生長速度定時采集圖像，并且對其成管長度、覆蓋面積、成環數和結點進行測量和記錄，并且對其進行統計分析；4、分上下孔的ibidi血管生成載玻片能去除凹液面，使成像效果更好。（Matrigel鋪在下孔，細胞鋪在Matrigel上，上孔充滿培養基）2、數據分析（在特定的時間點采集圖片，并且進行圖像分析（Wimasis全自動分析）測量小管長度，成環數，細胞覆蓋面積和結點。之后在對測量結果進行統計分析以說明實驗結果。）三、實驗具體步驟1、準備基質膠1）實驗前一天將Matrigel置于冰盒中，放入4度冰箱，使膠能過夜緩慢融化。（注意：同樣要準備一些4攝氏度預冷的頭用于吸取Matrigel）。2）開始實驗前，將Matrigel始終保持放在冰盒中。3）打開滅菌包裝，取出ibidi血管生成載玻片。4）每孔中加入10μlMatrigel。注意頭要垂直于內孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流經上孔而留下殘留膠。由于Matrigel流動性不強，并且有可能移液不準確，有可能打入10μl的膠，卻不能填滿血管生成載玻片的下孔——這樣，必然會影響到實驗的成像結果。北京怎樣科研技術服務GPM實驗室