GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結合、第二信使產生、下游信號通路活化等多個層面。均相發光技術多方面滲透于此領域。對于配體結合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標記供體,配體標記受體。對于GPCR活化后比較關鍵的cAMP積累或IP3/DAG產生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發光免疫分析。細胞裂解后,內源性cAMP與加入的標記cAMP競爭結合有限量的抗cAMP抗體。抗體結合事件通過FRET或Alpha技術被檢測,信號強度與內源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細胞裂解液中進行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。均相發光技術服務平臺,為您提供專業的技術支持和解決方案!廣西化學發光均相發光

均相發光是一種先進的生物化學檢測技術,其關鍵特征在于整個檢測反應過程均在均一的液相中進行,無需任何固相分離步驟(如洗滌、離心)。 它通過巧妙的設計,將待測物的特異性識別事件(如抗原-抗體結合、酶-底物反應)直接轉化為可檢測的光信號。 實現這一目標的關鍵在于依賴能量轉移、空間位阻改變或化學環境變化等機制,使信號分子(供體)與淬滅分子(受體)或發光底物在結合事件發生前后,其相互作用效率發生明顯改變,從而導致發光信號的增強或猝滅。與傳統的異相免疫分析(如ELISA)相比,均相發光技術具有操作簡便、通量高、易于自動化、試劑消耗少、檢測速度快等突出優點,極大地推動了高通量藥物篩選、臨床診斷和基礎生命科學研究的發展。湖南CRET技術均相發光均相化學發光在全球體外診斷市場的競爭態勢如何?

評估疫苗免疫效果或康復者血清中和能力的關鍵是病毒中和抗體檢測。傳統的空斑減少中和試驗(PRNT)耗時費力。基于假病毒系統的均相發光中和試驗已成為高通量替代方案。將表達熒光素酶的報告基因包裝進假病毒顆粒(攜帶目標病毒的囊膜蛋白)。當假病毒炎癥細胞時,會驅動熒光素酶表達。如果樣本中存在中和抗體,則會阻斷炎癥,導致熒光素酶信號下降。檢測時只需在炎癥后裂解細胞并加入發光底物,即可實現快速、定量、高通量的中和抗體滴度測定,在COVID-19等疫病中發揮了重要作用。
研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)對于理解細胞信號網絡至關重要。傳統的酵母雙雜交、免疫共沉淀等方法操作復雜、通量低。以Alpha技術為表示的均相發光方法徹底改變了這一局面。將靶蛋白A與供體珠偶聯,互作蛋白B與受體珠偶聯。當A和B在溶液中相互作用時,拉近兩珠產生信號。該方法可在純化蛋白、細胞裂解液甚至活細胞培養基中進行,不只能驗證已知互作,更能用于高通量篩選破壞或促進特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以實時監測互作動力學,研究互作強度,為藥物發現和基礎生物學提供了強大工具。均相化學發光的檢測速度如何,能否滿足快速診斷需求?

激酶是重要的藥物靶點,其活性檢測是藥物篩選的關鍵。均相發光技術,尤其是TR-FRET和Alpha技術,為此提供了理想平臺。以TR-FRET為例:將待測激酶、底物肽、ATP與待篩選化合物共同孵育。體系中包含兩種抗體,一種針對磷酸化底物(帶供體標記),另一種針對底物肽的標簽(帶受體標記)。只有當激酶活性正常,底物被磷酸化后,兩個抗體才能同時結合到底物肽上,使供受體靠近產生FRET信號。若化合物能抑制激酶,則磷酸化水平下降,FRET信號減弱。這種方法無需分離,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中實時或終點法檢測,通量極高,是發現激酶抑制劑的主流手段。均相化學發光在激*類檢測方面有何突出表現?廣東均相發光應用領域
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表面等離子體共振(SPR)是一種實時、無標記的生物分子相互作用分析技術,能提供結合動力學(kon, koff)和親和力(KD)的精確數據。均相發光技術(如TR-FRET, Alpha)則是一種基于標記的高通量終點法或實時動力學檢測。兩者具有很好的互補性:SPR常用于前期的靶點-配體相互作用的詳細表征和驗證;而基于此驗證過的相互作用對,開發出的均相發光檢測方法,則可以用于后續的大規模化合物庫篩選和功能學研究。將兩者結合,構成了從機理研究到大規模篩選的完整工作流程。廣西化學發光均相發光