相較于熒光或比色法,化學發光作為均相檢測的信號系統具有多重獨特優勢。首先,它無需外部激發光源,從而完全避免了光源不穩定、樣本自發熒光及光散射所帶來的背景干擾,理論上能獲得極高的信噪比和靈敏度。其次,化學發光反應產生的光子信號強度在一定范圍內與反應物濃度直接相關,動態范圍寬,可跨越數個數量級。再者,化學發光體系(如魯米諾、吖啶酯)的反應動力學多樣,可滿足從快速閃光到持久輝光的不同檢測需求。比較后,化學發光反應的啟動通常由單一試劑(如過氧化氫、堿)觸發,易于控制,非常適合自動化儀器上的順序注射和即時讀數。這些特性使其成為實現超靈敏、高穩健性均相檢測的理想信號輸出模式。體外診斷新機遇!均相發光新產品,助您搶占先機!吉林均相發光免疫分析

均相化學發光技術的實現,主要依賴于兩種設計哲學。第一種是直接能量轉移路徑,表示技術為AlphaLISA/AlphaScreen。其關鍵是使用能產生單線態氧的供體微珠和含有化學發光劑的受體微珠。只有當生物識別事件將兩者拉近至200納米以內時,供體產生的單線態氧才能有效觸發受體珠內的化學發光反應。未結合的微珠因距離過遠,單線態氧在擴散途中淬滅,不產生信號。第二種是活性調控路徑,即生物識別事件直接調控化學發光反應的效率或速率。例如,將化學發光反應的催化劑(如酶)或其抑制劑/共反應物與生物分子偶聯,當目標分子存在導致它們接近或分離時,化學發光信號被開啟或關閉。這兩種路徑均巧妙地利用“臨近”或“調控”將特異性識別與信號產生直接耦合。黑龍江CRET技術均相發光應用領域浦光生物均相化學發光,一步到位!

熒光共振能量轉移(FRET)是均相發光技術中應用比較多方面的信號產生機制之一。其原理是:當一個熒光基團(供體,Donor)的發射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發態能量會以非輻射方式轉移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當目標分子存在并促使這對生物分子結合時,供體與受體被拉近,發生有效的FRET,導致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標分析物。
在傳染病診斷領域,均相發光技術主要用于抗原或抗體的高靈敏檢測。例如,利用TR-FRET原理,可以設計檢測病毒抗原的均相免疫分析。將針對病毒抗原不同表位的兩種抗體分別標記供體和受體,樣本中若存在病毒抗原,則形成免疫復合物并產生FRET信號。該方法快速,可用于病原體篩查。在病毒學研究中,均相發光可用于評估病毒進入(如基于熒光素酶的報告病毒)、病毒復制或抗病毒藥物的效果。其高通量特性有助于快速篩選廣譜抗病毒化合物。告別繁瑣操作,均相化學發光來了!

生物發光共振能量轉移(BRET)是一種天然的或工程化的均相檢測技術。它利用生物發光蛋白(如海腎熒光素酶Rluc)作為供體,催化底物(如腔腸素)產生化學發光,該能量直接轉移給鄰近的熒光蛋白(如GFP、YFP)受體,使其發出熒光。BRET無需外部光源激發,完全消除了光散射和自發熒光的背景,信噪比極高。在活細胞研究中,可將Rluc和熒光蛋白分別與兩個可能相互作用的靶蛋白融合,通過監測BRET信號來實時、動態地研究蛋白互作的空間接近性和動力學,是研究GPCR二聚化、信號轉導復合物組裝的強大工具。均相化學發光與熒光免疫技術相比,優勢在哪?體外診斷均相發光的原理
均相化學發光在激*類檢測方面有何突出表現?吉林均相發光免疫分析
外泌體等細胞外囊泡(EVs)是疾病診斷的潛在生物標志物來源。其分離和表征通常繁瑣。均相化學發光技術提供了快速分析方案。利用EVs表面普遍或特異性表達的膜蛋白(如CD9、CD63、CD81或相關抗原),將針對不同蛋白的抗體分別偶聯Alpha供體珠和受體珠。當EVs存在時,多個抗體結合到同一個EV上,拉近微珠產光信號,從而實現EVs的定量。通過使用不同抗體組合,還可以對EVs進行亞群分型分析。這種方法無需超速離心,操作簡單,有望用于臨床樣本的快速篩查。吉林均相發光免疫分析