實時熒光定量pCR技術服務實時熒光定量PCR技術服務（DH1002）一.服務內容1、引物設計：客戶提供目的基因序列，我們可為客戶設計引物。2、RNA提取：從人或動物細胞、組織等樣品中提取RNA樣品。3、逆轉錄：對樣品中RNA反轉錄成cDNA。4、實時熒光定量pCR檢測（1）按體系加樣（2）設定程序實時熒光定量pCR（3）pCR鑒定（4）數據導出5、進行內參檢測。6、預實驗及正式實驗服務。二.樣品要求1、細胞＞1×10^7；組織＞50mg；細菌濕重＞1mg等。2、樣品RNA濃度＞100ng/ml或cDNA樣本>5ug。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。三.收費標準服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）1預實驗（含引物設計合成及檢測）元/指標5-72RNA抽提50元/樣本13逆轉錄25元/樣本14SYBRGreen染料法：10個樣本以內元/樣本/指標7-105SYBRGreen染料法：10-20個樣本元/樣本/指標7-106SYBRGreen染料法：>20個樣本元/樣本/指標10-15SYBRGreen染料法RealtimePCR原理（圖來自網絡）四、客戶提供材料1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關的必要資料（具有保密性的材料除外）。2、RNA相應試劑：請您提供質量保證的試劑（或委托我公司準備）。轉化醫學研究，橋接基礎研究與臨床應用，加速科研成果向臨床實踐的轉化。上海整體科研技術服務優化

    原代細胞定制（DH0001)相關知識：將動物某組織，經酶法或機械處理法分離成單細胞，并在合適的培養基中篩選出特定細胞，使得目的細胞得以生存、生長和繁殖，稱為原代細胞分離培養。服務說明:1、客戶需提供新鮮無菌的足量組織樣本或動物模型。2、請與我方溝通該組織（或動物模型）的取材部分、要求、儲存及運輸條件，以方便原代細胞取材，保證實驗的順利進行。3、若需要在我方構建動物模型，需提前告知，我方好提前做好模型動物飼養和動物模型的構建。4、原代細胞鑒定用的一抗或特殊染液需由客戶提供或者我方代為購買5、若有原代細胞的培養條件及相關的實驗方案或參考文獻也可提供給我方（保密信息除外），以方便我方實驗順利進行；若原代細胞需特殊培養基請自行提供或我方代為購買。6、以上服務說明都需與我方提前溝通，以保證實驗的順利進行。服務內容：服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0001-1原代細胞的分離與培養面議10-30DH0001-2原代細胞的鑒定面議5-7注：具體價格視情況而定交付標準:1.提供P0-P2代的細胞，活力達80%以上，純度達95%以上，無污染。2.完整實驗報告（包括細胞培養條件，細胞圖片及鑒定結果）一份3.提供需做其它鑒定。上海整體科研技術服務優化生物標志物驗證服務，通過大樣本隊列研究，驗證潛在生物標志物的臨床應用價值。

    基因克隆及載體構建服務基因克隆及載體構建服務（DH1001）一.服務內容1、引物設計：客戶提供目的基因及相關材料（具有保密性的材料除外）2、質粒制備：由客戶提供或由我公司代為購買。3、克隆載體：由客戶提供或由我公司代為購買。4、基因亞克隆：1)DNA定向克隆到新的載體，準確度高。2)可完成5kb以上DNA長片段的克隆.3)較個工作日即可完成二.樣品要求1、客戶需提供克隆基因信息及經測序驗證的質粒模板>5ul（）2、客戶需提供克隆載體2ug/個。3、非常用的限制性內切酶5ul/個注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。三.收費標準服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）1基因長度（bp）：≤1000bp元5-72基因長度（bp）：1001-2000bp元7-103基因長度（bp）：2001-3000bp2500-3500元10-154基因長度（bp）：＞3000bp詢價咨詢四、客戶提供材料1、客戶需提供克隆基因信息及經測序驗證的質粒模板。（如未測序，則需額外增加測序費用）2、客戶需提供克隆載體及相關信息。（如為自構載體，需提供載體克隆位點信息及測序結果）3、非常用的限制性內切酶或其他試劑需客戶提供，或我司代為購買。

    如何判斷是否加入了合適體積的Matrigel：我們只需用一張格子紙就能知道自己的移液調整到多少能正好把下孔填滿。如上圖所示，垂直透過每個孔看下面的格子紙，如果格子被縮小了，那么就說明膠沒加滿，格子被放大了，那么膠就加多了，格子沒發生什么變形，這才是剛剛加滿下孔的狀態。2、凝膠1）蓋上ibidi血管生成載玻片的蓋子。2）準備一個10cm的培養皿，放入浸過水的紙巾，制成一個濕盒。3）將ibidi血管生成載玻片放入培養皿中，蓋上培養皿蓋。4）將整個培養皿放入培養箱中，靜置30分鐘左右，等待膠凝結。5）等待同時準備細胞懸液。3.鋪細胞加入細胞的量直接影響實驗結果，所以在正式實驗開始之前，要對不同類型的細胞和使用數量進行預實驗。獲得比例的細胞密度。我們的實驗使用HUVEC細胞，每孔種10000個細胞即可。1）準備密度為2×105的細胞懸液，充分混勻。2）將膠已經凝固的ibidi血管生成載玻片從濕盒中取出。3）每孔加入50μl的細胞懸液，注意保持頭垂直在上孔的上方，不要接觸下孔的凝膠。可以使用排。4）同樣用格子紙查看是不是加了足夠量的液體，如果沒有，加入無細胞的培養基，使上孔液體正好加滿。5）蓋上蓋，靜置，一段時間后。分子診斷技術，如PCR、FISH等，快速準確檢測病原體、基因突變等，指導個體化療愈。

    也可以挑去單克隆細胞株進行進一步培養，以得到滿意的穩定表達目的基因的細胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測目的基因的表達量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細胞株：a.正常細胞株；b.空載病毒載體的細胞株；c.過表達目的基因的病毒載體的細胞。8)在后續培養傳代該穩轉細胞株時，培養基中需添加低濃度Puromycin做壓力篩選條件。注意事項1.為避免慢病毒后細胞死亡，務必保證原始細胞無支原體污染。2.查閱壓力篩選條件在目標細胞系中穩轉株篩選的致死用量信息。3.查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的滴度。4.轉染后可以進一步進行單克隆穩轉株培養，可采用稀釋法和培養皿挑取法。5.慢病毒轉染載體種類繁多，應選擇適合目的細胞系的載體進行病毒的包裝和轉染。常見問題轉染時病毒滴度較低可以將6cm皿培養的HEK293T更換為10cm皿培養，或使用超速離心沉淀法或PEG-8000濃縮法提高病毒滴度。納米藥物遞送系統，利用納米技術提高藥物靶向性，減少副作用，提升療愈效果。貴州口碑好的科研技術服務公司

現疾病的納米醫學技術應用，開發基于納米材料的診斷試劑與療愈手段，實準確定位與療愈。上海整體科研技術服務優化

    大到動物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時多長時間。建議反復總結出每天實驗的優缺點。做任何一個操作之前，建議提前腦海中反復模擬，準備好相關工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實驗操作節奏和個人心情。筆者曾經灌胃操作的時候發現藥物竟然忘帶了，只好重新回實驗室準備，那真叫一個郁悶。仔細記錄每日實驗過程無論是碩士還是博士，導師給我們上的堂課往往就是交代我們要詳細記好實驗記錄，只要是和實驗相關的，無論是照片，還是文字，必須要及時事無巨細地詳細記錄。并且要備份好每一份實驗記錄。我個人一般喜歡每天及時地記在「科研實驗記錄本」上面，然后拍照掃描成電子版儲存在電腦和云端。時間規劃首先，個人是不贊同每天24小時泡在實驗室的，高效率是關鍵。建議提前一天規劃好第二天需要做的事情，按照代辦事項的格式逐條列出，哪一個時間段需要做什么事情？這樣的好處有兩點，一個是自己提前把時間預約好，可以留出足夠的時間休息和娛樂；另一個是在執行計劃的時候往往會有一種時間緊迫感，辦事起來往往更高效且不會遺漏。總之，預實驗就是迷你版正式實驗，希望小伙伴們在進行預實驗的時候一定要盡可能地準備周全，這樣才能快的推進正式實驗。上海整體科研技術服務優化