實時熒光定量pCR技術(shù)服務(wù)實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)（DH1002）一.服務(wù)內(nèi)容1、引物設(shè)計：客戶提供目的基因序列，我們可為客戶設(shè)計引物。2、RNA提取：從人或動物細胞、組織等樣品中提取RNA樣品。3、逆轉(zhuǎn)錄：對樣品中RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。4、實時熒光定量pCR檢測（1）按體系加樣（2）設(shè)定程序?qū)崟r熒光定量pCR（3）pCR鑒定（4）數(shù)據(jù)導(dǎo)出5、進行內(nèi)參檢測。6、預(yù)實驗及正式實驗服務(wù)。二.樣品要求1、細胞＞1×10^7；組織＞50mg；細菌濕重＞1mg等。2、樣品RNA濃度＞100ng/ml或cDNA樣本>5ug。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。三.收費標準服務(wù)編號服務(wù)內(nèi)容服務(wù)價格服務(wù)周期（工作日）1預(yù)實驗（含引物設(shè)計合成及檢測）元/指標5-72RNA抽提50元/樣本13逆轉(zhuǎn)錄25元/樣本14SYBRGreen染料法：10個樣本以內(nèi)元/樣本/指標7-105SYBRGreen染料法：10-20個樣本元/樣本/指標7-106SYBRGreen染料法：>20個樣本元/樣本/指標10-15SYBRGreen染料法RealtimePCR原理（圖來自網(wǎng)絡(luò)）四、客戶提供材料1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關(guān)的必要資料（具有保密性的材料除外）。2、RNA相應(yīng)試劑：請您提供質(zhì)量保證的試劑（或委托我公司準備）。動物模型構(gòu)建服務(wù)，根據(jù)研究需求定制疾病模型，如心血管疾病等，為藥物篩選和功能驗證提供可靠平臺。江蘇本地科研技術(shù)服務(wù)機構(gòu)

    具有保密性的材料除外）。2、目的蛋白相應(yīng)一抗：請您提供質(zhì)量保證的一抗（或委托我公司準備）。抗體的使用量通過預(yù)實驗后進行確認，原則上不回收使用一抗。3、陽性對照樣品（盡量提供）。4、相關(guān)文獻（可選）。注：若要檢測磷酸化蛋白，請在2-3個月內(nèi)進行，因為長時間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。五、提交給客戶結(jié)果1、預(yù)實驗顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），預(yù)實驗采取3個一抗稀釋度，選取部分實驗樣本。2、正式實驗顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。3、完整實驗報告。六、服務(wù)項目說明1、提供的蛋白量與待檢測的目的蛋白數(shù)量有關(guān)，蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。2、每張膜樣品數(shù)量為1-8個，不足8個以8個收取。9-16個樣品為2張膜，17-24個樣品為3張膜；以此類推。舉例：7個樣品，1個目的蛋白，算1張膜；有9個樣品，1個目的蛋白，算2張膜；7個樣品，2個目的蛋白，算2張膜，有9個樣品，2個目的蛋白，算4張膜。注：以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來進行上樣時，需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。3、選擇部分樣品進行預(yù)實驗，參考目的蛋白一抗說明書進行3個稀釋度的預(yù)實驗。青海怎樣科研技術(shù)服務(wù)優(yōu)化微生物藥物篩選平臺，針對耐藥菌開發(fā)新型抗生劑，應(yīng)對全球抗生劑危機。

    細胞鑒定服務(wù)細胞鑒定服務(wù)（DH0007）一、服務(wù)介紹為了后續(xù)實驗成功進行，我們對分離培養(yǎng)的細胞做一個細胞鑒定實驗。細胞鑒定實驗包括形態(tài)學鑒定、免疫組織細胞化學鑒定（免疫熒光化學鑒定）、流式細胞儀鑒定二、服務(wù)內(nèi)容及價格服務(wù)編號服務(wù)內(nèi)容服務(wù)價格服務(wù)周期（工作日）DH0007-1免疫組織細胞化學鑒定（免疫熒光化學鑒定）100元/片/指標7-10DH0007-2流式細胞儀鑒定200元/樣本7-10三、客戶提供1.客戶需提供生長狀態(tài)良好的細胞株及其他用于實驗材料，如藥物、質(zhì)粒、病毒、相關(guān)抗體等；（若客戶需要采購其它檢測試劑盒需提前告知）2.提供的生物材料中攜帶熒光，請務(wù)必告知3.實驗前，客戶需告知具體的細胞處理方式及詳細要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。四、服務(wù)流程1、細胞培養(yǎng)2、藥物處理3、試劑處理4、檢測（熒光檢測或流式細胞儀檢測）5、撰寫實驗報告五、提交給客戶結(jié)果1、檢測原始數(shù)據(jù)一份2、完整實驗報告一份，包括實驗流程和圖片等3、結(jié)果分析報告（包括統(tǒng)計分析報告）六、服務(wù)項目說明1.實驗周期：具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內(nèi)容而定。2.對實驗有特殊要求，請另詢價。3.雙方簽訂合同后，收取50%首付后啟動實驗。

    也可以挑去單克隆細胞株進行進一步培養(yǎng)，以得到滿意的穩(wěn)定表達目的基因的細胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測目的基因的表達量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細胞株：a.正常細胞株；b.空載病毒載體的細胞株；c.過表達目的基因的病毒載體的細胞。8)在后續(xù)培養(yǎng)傳代該穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株時，培養(yǎng)基中需添加低濃度Puromycin做壓力篩選條件。注意事項1.為避免慢病毒后細胞死亡，務(wù)必保證原始細胞無支原體污染。2.查閱壓力篩選條件在目標細胞系中穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選的致死用量信息。3.查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的滴度。4.轉(zhuǎn)染后可以進一步進行單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)株培養(yǎng)，可采用稀釋法和培養(yǎng)皿挑取法。5.慢病毒轉(zhuǎn)染載體種類繁多，應(yīng)選擇適合目的細胞系的載體進行病毒的包裝和轉(zhuǎn)染。常見問題轉(zhuǎn)染時病毒滴度較低可以將6cm皿培養(yǎng)的HEK293T更換為10cm皿培養(yǎng)，或使用超速離心沉淀法或PEG-8000濃縮法提高病毒滴度。高通量基因測序技術(shù)，通過大規(guī)模并行測序，快速解析遺傳信息，為準確醫(yī)療提供個性化治療方案的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    每孔中加入100μL無血清培養(yǎng)基，在培養(yǎng)箱中放置30min。4.接種細胞a.將狀態(tài)良好的細胞進行消化，離心，用PBS洗1-2遍，用無血清培養(yǎng)基重懸細胞，調(diào)整細胞密度至1-10×105/ml（需要做預(yù)實驗確定具體的細胞密度）；b.在下室中加入500μL的含10%FBS的培養(yǎng)基，將小室小心放入24孔板內(nèi)，在上室中加入細胞懸液100μL-200μL，放入培養(yǎng)箱中（需要做預(yù)實驗確定具體的培養(yǎng)時間）。5.固定染色、拍照及計數(shù)a.到時間點后將小室取出，用PBS清洗小室，用棉簽輕柔擦去上室細胞和Matrigel后，用4%多聚甲醛固定或甲醇20min，將小室適當風干，用min，PBS清洗3遍，于37℃干燥。b.將小室置于顯微鏡下，隨機選取5個視野，拍照并計數(shù)。三、注意事項，分裝時將整瓶Matrigel埋沒在碎冰盒中，再將冰盒置于4℃冰箱中，建議放在冰箱靠后的位置，放置過夜，避免使用冰箱門進行解凍，因為其內(nèi)裝物的溫度在反復(fù)打開時會迅速上升，導(dǎo)致材料過早凝膠化。分裝后置于-20℃保存，長期保存可放于-80℃冰箱中；2.如何盡量避免增殖對結(jié)果的影響如果在侵襲實驗期間發(fā)生了大量的增殖，那么計算出的侵襲數(shù)據(jù)將受到影響。因此，侵襲實驗時間越短，增殖對數(shù)據(jù)的影響就越小。當然。心血管功能評估系統(tǒng)，利用無創(chuàng)技術(shù)監(jiān)測心臟結(jié)構(gòu)與功能，評估心血管疾病風險與療愈效果。江蘇哪一家科研技術(shù)服務(wù)做得好

神經(jīng)科學研究平臺，提供腦成像、電生理記錄等服務(wù)，探索大腦結(jié)構(gòu)與功能，助力神經(jīng)退行性疾病研究。江蘇本地科研技術(shù)服務(wù)機構(gòu)

    大到動物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時多長時間。建議反復(fù)總結(jié)出每天實驗的優(yōu)缺點。做任何一個操作之前，建議提前腦海中反復(fù)模擬，準備好相關(guān)工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實驗操作節(jié)奏和個人心情。筆者曾經(jīng)灌胃操作的時候發(fā)現(xiàn)藥物竟然忘帶了，只好重新回實驗室準備，那真叫一個郁悶。仔細記錄每日實驗過程無論是碩士還是博士，導(dǎo)師給我們上的堂課往往就是交代我們要詳細記好實驗記錄，只要是和實驗相關(guān)的，無論是照片，還是文字，必須要及時事無巨細地詳細記錄。并且要備份好每一份實驗記錄。我個人一般喜歡每天及時地記在「科研實驗記錄本」上面，然后拍照掃描成電子版儲存在電腦和云端。時間規(guī)劃首先，個人是不贊同每天24小時泡在實驗室的，高效率是關(guān)鍵。建議提前一天規(guī)劃好第二天需要做的事情，按照代辦事項的格式逐條列出，哪一個時間段需要做什么事情？這樣的好處有兩點，一個是自己提前把時間預(yù)約好，可以留出足夠的時間休息和娛樂；另一個是在執(zhí)行計劃的時候往往會有一種時間緊迫感，辦事起來往往更高效且不會遺漏。總之，預(yù)實驗就是迷你版正式實驗，希望小伙伴們在進行預(yù)實驗的時候一定要盡可能地準備周全，這樣才能快的推進正式實驗。江蘇本地科研技術(shù)服務(wù)機構(gòu)