蛋白抽提/WesternBlotting技術(shù)服務(wù)WesternBlotting技術(shù)服務(wù)(DH1004)一.服務(wù)內(nèi)容1、蛋白提取：從人或動物細胞、組織，細胞等樣品中提取蛋白樣品。2、蛋白定量：對樣品中蛋白進行半定量分析。3、WesternBlot檢測（1）電泳：聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白樣品。（2）濕法轉(zhuǎn)印。（3）雜交：用抗體鑒定膜上的特定蛋白。（4）顯色：ECL熒光顯色，黑條帶白背景照片4、提供蛋白內(nèi)參檢測（所有內(nèi)參抗體均不收取費用）。5、預(yù)實驗及正式實驗服務(wù)。二.樣品要求1、細胞＞1×10^7；組織＞30mg；細菌濕重＞1mg等。2、樣品蛋白濃度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣品。3、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白、有陽性表達的細胞或組織、商品化的陽性對照產(chǎn)品等）作為陽性對照。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。三.收費標準服務(wù)項目免疫學(xué)檢測服務(wù)內(nèi)容周期產(chǎn)物/報告價格（元）DH1004-01樣品準備總蛋白提取、定量、質(zhì)控3天總蛋白質(zhì)控報告100元/樣DH1004-02免疫印跡（WB）WB預(yù)實驗，質(zhì)控WB體系5-10天完整實驗報告1000元/膜WB檢測正式實驗10-15天完整實驗報告1000元/膜四、客戶提供材料1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關(guān)的必要資料。上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒的應(yīng)用范圍。浙江哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

以及酶或熒光偶聯(lián)二抗，檢測單細胞水平的DNA合成（BrdUbased）。前者通過免疫熒光檢測，后者通過熒光顯微鏡檢測。優(yōu)點是：使用核酸酶變性DNA，在不傷害細胞完整性的情況下使抗體結(jié)合BrdU。體內(nèi)外均可進行標記，且可同時使用其他標記進行檢測，操作安全簡便。適用于貼壁或懸浮細胞，冰凍或福爾馬林包埋組織切片。EdU與BrdU檢測法不同，EdU-Click檢測，如EdU-Click594（BCK-EDU594）無需進行DNA變性來檢測摻入的EdU，而是通過一次快速、高度特異性的點擊反應(yīng)，將EdU高效地摻入到新合成的DNA之中,通過EdU與不同熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性，從而確地反映細胞的增殖情況。這一類細胞增殖用熒光標記采用溫和的點擊實驗方案，準確且兼容各種抗體實驗方案，整個實驗可在30分鐘內(nèi)完成，在結(jié)果的數(shù)據(jù)豐富程度方面，堪比多重分析方法。湖南EdU細胞增殖檢測試劑盒原理EdU細胞增殖檢測試劑盒使用時的注意事項。

4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜。抗體以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標記方法免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強時，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。

按照以下的表格進行染色反應(yīng)液的配制：染色反應(yīng)液組分500μl1ml2ml5ml1×反應(yīng)緩沖液430μl860μlmlml催化劑溶液20μl40μl80μl200μlTAMRA紅色熒光溶液μlμl5μlμl緩沖添加劑50μl100μl200μl500μl3、每孔加入100μl配置好的檢測混合液，以覆蓋細胞為宜，避光、室溫孵育30分鐘；4、棄染色反應(yīng)液，加入100μlTritonX-100細胞滲透液清洗2-3次，每次10分鐘；5、棄細胞滲透液，用PBS洗兩次，每次5分鐘。DNA染色1、將Hoechst33342用RNase-free水溶液1：1000進行稀釋得到終濃度為5μg/ml的1×Hoechst染色液；2、每孔加入100μl1×Hoechst染色液，室溫避光孵育20-30分鐘后，棄染色液；3、每孔加入100μlPBS洗細胞兩次，去掉洗液。圖像獲取及分析建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4°C條件下避光濕潤保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測。上海東寰與您分享EdU細胞增殖檢測試劑盒對如今市場的影響。

EdU細胞增殖檢測和BrdU細胞增殖檢測的對比。小分子化合物AndyFluor?azide與EdU之間的點擊化學(xué)(ClickChemistry)反應(yīng)不需要DNA變性，就可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析，該反應(yīng)不受雙鏈DNA中堿基對的影響，因此客戶了BrdU摻入法的弊端。圖2.使用EdU細胞增殖檢測試劑盒對細胞和組織的染色效果。使用10μMEdU處理A549細胞2小時，然后分別使用AndyFluor?488azide(綠色,上圖)、AndyFluor?594azide(紅色,中間圖)檢測細胞增殖活性，使用DAPI進行復(fù)染（藍色）。腹腔注射EdU到小鼠體內(nèi)（每公斤小鼠注射5mgEdU），分別于0、12、24小時之后取小鼠腸組織，制成切片用AndyFluor?488azide(綠色,下圖)檢測細胞的增殖情況，使用DAPI進行復(fù)染（藍色）。上海哪家EdU細胞增殖檢測試劑盒值得信賴？湖南EdU細胞增殖檢測試劑盒原理

EdU細胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展前景如何呢？浙江哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

EdU法細胞增殖成像分析試劑盒的功能和實驗建議中文名稱細胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(綠色熒光)貨號KTA2030規(guī)格￥500/50T背景資料：細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗藥物效果的基礎(chǔ)實驗手段。精確的檢測細胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測試劑盒是Brdu方法的性突破。EdU（5-溴-2-脫氧尿嘧啶）試劑盒是一種嘧啶類似物，可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。實驗建議細胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(綠色熒光)，是BrdU方法的**性突破試劑盒組分：EdU(10mM)、AbFluor488疊氮化物浙江哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒購買