人乳腺*裸鼠模型：1、實驗方法：**細胞移植法、**組織塊移植法。a.**細胞移植：**細胞在二氧化碳培養箱培養至足夠數量。取對數生長期的**細胞，用0.25％胰酶消化，用不完全培養液配成濃度不低于1×107個/mL的細胞懸液，于小鼠乳腺脂肪墊注射0.2mL細胞懸液，注意每次注射前需混勻細胞懸液。b.**組織塊移植：**接種于動物長至1cm時，取新鮮的**組織塊，在不完全培養液中漂洗，切取生長良好、魚肉裝的瘤組織，將其剪切成約1.5mm直徑的小**塊。將動物接種部位消毒，剪一小口，將小**塊經這一小口接種到小鼠乳腺脂肪墊，如切口較大需要縫合切口。驗性動物模型是指研究者通過使用物理的、化學的和生物的致病因素作用于動物。虹口區口碑好的疾病動物模型建模

    配制成6mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實驗建立大鼠卵巢早衰模型1.實驗儀器及材料：如表1所示。表12.實驗方法：①動物信息：sd大鼠，雌性，6-8周，體重180-220g。普通環境飼養，滅菌飼料飼養，自由飲水。②分組及給藥劑量：如表2所示。表2③給藥途徑及頻率：腹腔注射；2mg、3mg組連續注射7天；4mg、6mg組***天、第八天注射；對照組連續7天注射生理鹽水。④病理檢測：末次注射后15天，動物麻醉，采集血液，分離血清，elisa法測定血清中e2、fsh、lh水平變化情況。解剖動物，取卵巢組織稱重，對大鼠的卵巢組織形態學進行觀察。注射期間每天稱重，給藥后每周稱重兩次，每天進行陰道涂片檢測動情周期。3.統計方法：采用graphpad進行統計分析。所有計量資料均采用均值±標準差表示采用單因素方差分析各組間均值的差異，p＜。4.試驗結果：(3mg組注射完成后*存活一只，不進行統計)如表3、表4、圖1、圖2、圖3所示：①***水平：與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組e2水平均降低，但是只有2mg組有明顯降低(p＜)，如圖1所示；與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組fsh水平均上升，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖2所示；與空白組相比。南通裸鼠疾病動物模型建模動物疾病模型廣泛應用于新藥靶點發現及篩選。

    步驟3、pmsg處理c57bl/6雌性小鼠(6周齡，平均體重20g)，46h后注射hcg，與雄性小鼠合籠交配，次日取受精卵進行顯微注射，將步驟1的grna1、grna2、cas9蛋白以及線性化后的打靶載體一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠體內，產出小鼠，即f0代小鼠。上述步驟中grna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl，cas9蛋白購自newenglandbiolabs，貨號為m0386m。步驟4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr擴增產物測序，鑒定是否為嵌合體。本發明用于f0代小鼠pirb基因pcr鑒定的特異性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1對應的擴增產物大小為，primers2對應的擴增產物為。用于f0代小鼠測序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。

    pirb在軸突生長錐表達，位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經元突起的表達呈點狀分布。文獻表明，pirb表達隨年齡增加，特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到***效應。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細胞和動物模型。目前對于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉染在原代細胞和在體的轉染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點，為研究pirb在免疫系統或者神經系統的作用和機制提供了很好的工具。技術實現要素：本發明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動物模型。動物疾病模型廣泛應用于疾病機制研究。

    來源：ZSCI基礎研究中如果加入動物實驗部分則使得研究更加趨于完善，投稿時中稿率也相應會增加。但將動物實驗做好卻不是一件容易的事情。這篇文章主要講動物模型的構建技術，把骨科、糖尿病相關的動物模型構建做了一個***的技術匯總，建議先碼后讀，文章內容有部分做了簡化，想看詳細講解可以在文末獲取課件！一、骨科相關動物模型1.骨關節炎1）骨關節炎模型構建方法（誘發性）-關節腔內手術法、關節腔注射法。2）模型評分標準①SafraninO染色與OARSI評分（PMID：31046827、30942801）②HE染色與OARSI評分（PMID：30609097）③SafraninO染色與Mankin評分（PMID：30609097）2.骨質疏松癥1）骨關節炎模型構建方法去趨法模型PMID：31037128實驗動物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下進行雙側卵巢切除術以誘導骨質疏松癥，同時對照組小鼠*進行卵巢外置但未切除。2）模型檢測指標(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相關指標檢測3.類風濕性關節炎類風濕性關節炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病狀態，其特征是滑膜增生，軟骨退化和脊椎關節的骨侵蝕4.強直性脊柱炎1）強直性脊柱炎模型構建方法2）模型檢測指標。動物疾病模型的另一個富有成效的用途。連云港視覺疾病動物模型建模

便于研究者按實驗目的需要隨時采取各種樣品。虹口區口碑好的疾病動物模型建模

    卵巢早衰(pof)是指女性40歲前以閉經、不育、雌***缺乏及促性腺***水平升高為特征的一種疾病。一般人群中發病率為1％～3％，在繼發性閉經婦女中占4％～8％，在20歲以前的發病率為％。近年來pof在育齡婦女中的發生率有逐年升高且向年輕化發展的趨勢，由于卵巢早衰患者卵巢分泌的雌***量減少，即可導致一些其他疾病，如骨質疏松、泌尿生殖道萎縮、脂質代謝紊亂、心血管疾病。順鉑又稱順氯氨鉑、氯氨鉑、ddp、錫鉑，是目前常用的金屬鉑類絡合物，在分子中鉑原子對其抗**作用有重要意義。但只有順式才有意義，反式無效。其可與dna鏈交叉連接，顯示出細胞毒作用。溶解后在體內無需載體轉運，即可通過帶電的細胞膜。由于細胞內氯離子濃度低(4mmol/l)，氯離子為水所取代，電荷呈陽性，具有類似烷化劑雙功能基團的作用，可與細胞核內dna的堿基結合，形成三種形式的交聯，造成dna損傷，破壞dna復制和轉錄，高濃度時也抑制rna及蛋白質的合成。順鉑具有抗*譜廣、乏氧細胞有效、作用性強等優點，已普遍用于***睪丸*、卵巢*、子宮*、膀胱*、頸部*、前列腺*、腦*等，療效***。但順鉑用于****有一定的毒性，會引起副作用，與卵巢的損害有直接關系，有研究表明順鉑可誘導卵巢細胞凋亡。虹口區口碑好的疾病動物模型建模

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