PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

來源：發布時間：2025-12-19

大腸桿菌具有遺傳背景明確、便于培養與調控、蛋白表達量高、成本低廉且培養周期短等特點，是性價比高的蛋白表達系統。其中，K-12系列與B系列菌株是工業級生物工程中常用的大腸桿菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大規模生產質粒DNA，進而制備細胞基因治療產品與病毒載體類疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更適合高效轉染表達載體及常規蛋白的表達，例如病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細胞因子、酶類等產品。湖州申科生物依據這兩種菌株的特性，分別研發了大腸桿菌表達菌HCP殘留檢測試劑盒與大腸桿菌克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。

HCP 檢測結果可信度受抗體覆蓋率影響，該關鍵指標需經嚴謹方法驗證。PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

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昆蟲細胞桿狀病毒表達系統（IC-BEVS）是一種真核表達系統，以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細胞為宿主實現外源蛋白的生產。該系統具備便于規模化生產、培養成本低、生物安全性高等優勢，近年已逐步應用于重組蛋白、rAAV 載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等產品的生產，在生物制品重組蛋白表達領域已得到廣泛應用。Sf9 細胞系源自草地夜蛾細胞系（Spodoptera frugiperda cell line，簡稱 Sf），是當前較為常用的昆蟲細胞系之一。SHENTEK^® Sf9 HCP 殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯免疫吸附法），可對采用 Sf9 細胞系生產的生物制品中宿主細胞蛋白（HCP）殘留進行定量檢測。該試劑盒的抗體覆蓋率分別為 70.4%-96.0%（采用 IMBS-2D 法）和 91.2%（采用 IMBS-MS 法，Unique Peptide ≥2）。

北京宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比經完善驗證的湖州申科 IMBS 抗體覆蓋率平臺，結果可信且契合法規，可用于相關申報。

操作規范是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的關鍵因素之一。一方面，實驗人員的專業能力與實操經驗會影響檢測結果的準確性，熟練人員可準確完成樣品處理、試劑配制及儀器操作，降低人為誤差。另一方面，科學的HCP檢測方法在開發與應用階段，需納入操作的合理變動區間（即耐用性）并配套質控措施，從流程層面較大程度規避人為誤差對結果的干擾。此外，嚴格遵照標準操作流程（SOP）是保障檢測結果可靠性的關鍵，操作步驟不規范易造成結果重復性不佳或誤差擴大。目前，湖州申科已正式推出全自動HCP ELISA檢測系統，可完成樣品制備、孵育、洗板到數據采集的全流程操作，搭配實驗室信息管理系統（LIMS），能實現“輸入即輸出”，降低流程誤差。

LC-MS/MS 作為成熟穩定的蛋白質組學分析技術，依托超高分辨率與準確度，在生物分析領域中占據關鍵地位。該技術不僅可對低含量宿主細胞殘留蛋白（HCP）開展定性檢測，還能通過構建專屬蛋白質譜庫準確鑒定 HCP 的具體種類，為深度解析殘留蛋白組成提供重要支撐。不過該技術應用中面臨的主要挑戰，是如何優化 LC-MS 方法以契合 GMP 規范對產品放行檢測的嚴苛要求。在質譜檢測環節，引入表征明確的內標與外標蛋白，可準確分析 HCPs 的整體組成，并有效識別其中具有潛在風險的高風險蛋白。這一技術手段不僅為開發產品專屬 HCP ELISA 檢測方法提供有力數據支撐，還可助力工藝優化升級，加快推進生物制品從研發到獲批上市的全流程進度。

針對工藝相近的產品線，平臺型試劑盒能夠實現不同產品宿主細胞蛋白（HCP）殘留水平的監測。

宿主細胞蛋白（HCP）是生物制品中源自細胞基質的殘留雜質，異質性特征明顯。其復雜性主要體現在三方面：①理化特性差異：包含胞內與分泌蛋白（涉及關鍵生理功能），等電點（pI 3-11）、分子量（5-250kDa）及疏水性的區間跨度大；②上游工藝影響：不同發酵工藝（如細胞株選擇、培養條件控制）會誘導獨特的翻譯后修飾（PTM），進而增加 HCP 的總量與生化復雜性；③下游工藝與產物特性干擾：抗體、細胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝，會選擇性殘留特定 HCP；同時，產物形式（如大腸桿菌的包涵體 / 可溶性表達）也會直接影響 HCP 的殘留譜。針對特定生產工藝開發定制化檢測方案，是準確監控 HCP 殘留的關鍵所在。

圍繞 HCP 檢測試劑盒開發，需統籌法規適配、物料穩定、團隊專業響應及案例積累，構建體系化保障體系。浙江重組蛋白用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒

定制化 HCP 殘留檢測試劑盒的抗原校準品代表性更強，可有效降低 HCP 漏檢風險與定量誤差。PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學研究領域應用較多。伴隨基因治療產業的快速發展，它還成為質粒DNA（pDNA）生產的主要宿主菌。質粒樣品常規提取工藝中，常使用強堿性溶液進行細胞裂解與蛋白質變性，這種處理使其中的宿主細胞蛋白（HCPs）與傳統物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進而導致采用免疫學原理的檢測方法時，殘留檢測結果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，得到專屬抗體，可用于經堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白（HCPs）定量檢測。

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標簽：熱原檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測內毒素檢測支原體檢測宿主細胞殘留DNA檢測

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