在原核表達系統中外源基因不僅進行正向轉錄,有時還存在反向轉錄(即生成反義RNA),這種現象往往是外源基因表達不高的重要原因。另外,在真核系統,某些基因也存在反向轉錄,產生反義RNA,參與自身表達的調控。在這些情況下,要準確測定正向和反向轉錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。通過鑒別其特征波長或特征能量就可以確...
DNA探針根據其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應的基因經轉錄獲得mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DN...
DNA探針是**常用的核酸探針,指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針?,F已獲得DNA探針數量很多,有細菌、病毒、原蟲、***、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的,如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。以細菌為例,分子雜交技術用于細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要準確的多,是細菌分類學的一個發展方向。加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。對于任意一個給定的入射角θ有一個確定的波長λ滿足衍射條件。靜安區優勢探針現價電子探...
早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細胞基因轉錄或病毒復制過程中得到標記的,標記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測。例如,在篩選逆轉錄病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)的基因組DNA克隆時,因無DNA探針可利用,就利用HIV的全套標記mRNA作為探針,成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進行中的轉錄分析(nuclearrunontranscrip-tionassay)時,在體外將細胞核分離出來,然后在α-32P-ATP的存在下進行轉錄,所合成mR-NA均摻入同位素而得到標記,此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾...
2、能譜儀來自樣品的X光子通過鈹窗口進入鋰漂移硅固態檢測器。每個X光子能量被硅晶體吸收將在晶體內產生電子空穴對。不同能量的X光子將產生不同的電子空穴對數。例如,Fe的Kα輻射可產生1685個電子空穴對,而Cu為2110。知道了電子空穴對數就可以求出相應的電荷量以及在固定電容(1μμF)上的電壓脈沖。多道脈沖高度分析器中的數模轉換器首先把脈沖信號轉換成數字信號,建立起電壓脈沖幅值與道址的對應關系(道址號與X光子能量間存在對應關系)。電子探針又稱微區X射線光譜分析儀、X射線顯微分析儀。嘉定區挑選探針生產廠家2)X射線能譜分析法。無須分析晶體,而直接將探測器接收的訊號加以放大,進行脈沖幅度分析,通過...
禽流感基因探針制備探針濃度鑒定將禽流感病毒H9N2亞型毒株**白(NP)基因3′端較為保守的、約350bp的編碼序列通過限制性內切酶Hae¸切割、分離后,用隨機引物法制備Digoxigenin2112dUTP標記探針。測定該探針的濃度為100Lgöml。特異性試驗發現該探針只能與實驗室構建的、含有NP基因的重組載體pGEM2TE2NP和pBacPAK2NP以及A型流感病毒H9N2亞型、H3N2亞型以及H9N3亞型毒株基因組RNA結合出現特異性的顏色反應,而與實驗室常用的載體pGEM2Teasy、pBacPAK2His3、pTARGET和pGEMEX22以及新城疫病毒、傳染...
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚酶活性,使32P標記的互補核...
在原核表達系統中外源基因不僅進行正向轉錄,有時還存在反向轉錄(即生成反義RNA),這種現象往往是外源基因表達不高的重要原因。另外,在真核系統,某些基因也存在反向轉錄,產生反義RNA,參與自身表達的調控。在這些情況下,要準確測定正向和反向轉錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯合...
用此探針在DNA文庫中篩選,陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內含子序列,而原核則沒有。因此,真核基因組DNA探針用于檢測基因表達時雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優點有下面三點:①這類探針多克隆在質粒載體中,可以無限繁殖,取之不盡,制備方法簡便。②DNA探針不易降解(相對RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移,隨機引物法,PCR標記法等,能用于同位素和非同位素標記。為此,一般也采用鎢絲熱發射電子槍和2-3個聚光鏡的結構。黃浦...
探針的標記也可以采用隨機引物法,即向變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段,作為引物,當后者與單鏈DNA互補結合后,按堿基互補原則不斷在其3’OH端添加同位素標記的單核苷酸,這樣也可以獲得比放射性很高的DNA探針。DNA探針是以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測病原體。DNA探針將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標記后制成的探針??膳c固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進行互補結合,經放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。電子探針是法國制成的,是在1949年用電子顯微鏡...
細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因。各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫。然后用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。將此重組質粒標記后作探針進一步鑒定,亦可經DNA序列分析鑒定其基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。應用于地質、冶金材料、水泥熟料研究等部門。寶山區挑選探針售價(3)X射線強度測量系統。特征X射線,由B系統中...
特異性探針有三種形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是**常采用的探針。RNA探針用途很廣,也容易獲得,但其不穩定性限制了其商業用途。cDNA探針的獲得是,將特定的基因片段裝載到質?;蚴删w中,經過擴增、酶切、純化等復雜的步驟,才能得到一定長度的cDNA探針。這一過程比較復雜,有相應條件的實驗室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下,由核酸合成儀來完成,可廉價獲得大量的此類探針。質量也相對來說更為穩定。由于cDNA探針長度通常為數百至數千個堿基,所以有良好的信號放大作用,但其滲透性比較差。寡核苷酸探針一般為十數個至數十個堿基,滲透性強,但信號放大作用則較差,合成的多相...
安全**介紹,WiFi探針盒子確實可以通過技術手段獲取個人信息,用戶為避免信息泄露,可以在出門后關閉手機連接WiFi的功能,并不要在一些不合規的APP上提供真實個人信息。律師表示,利用探針盒子獲取他人手機號等隱私信息的行為涉嫌侵犯他人隱私,可能面臨民事侵權責任及治安管理處罰責任。實現原理1. WiFi信道掃描工具WiFi探針實現原理示意圖這種神秘的Wi-Fi探針,實際是“WiFi信道掃描工具”。市面上的WiFi有2.4G、5G兩個頻段,每個頻段有不同的信道劃分,Wi-Fi探針設備通過在各個信道被動監測,采集周圍的數據幀內容,發現周邊手機、筆記本、路由器等無線設備,從而滿足客流統計、精細營銷等需...
血凝素與生物素有非常高的親和性,當血凝素標記上過氧化物酶或堿性磷酸酶,經雜交反應**終形成探針-生物素-血凝素酶復合物(ABC法),酶催化底物顯色,觀察結果。ABC法底物顯色生成不溶物,以便觀測結果。酶標記法復雜、重復性差,成本高,但便于運輸、保存,靈敏度與放射物標記法相當。探針標記方法①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同時在3´端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分子DNA標記,(...
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚酶活性,使32P標記的互補核...
DNA探針根據其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應的基因經轉錄獲得mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DN...
(1)電子光學系統。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發原子發射特征X射線譜過程如下:圍繞原子核運動的內層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補充轟擊出的電子而發生躍遷,在躍遷過程中釋放出能量,即發射出X射線。(2)X射線譜儀。測量各種元素產生的X射線波長和強度,并以此對微小體積中所含元素進行定性和定量分析。特征X射線圖像顯像管的原理是:X射線束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線分光光度計的彎曲晶體上),經衍射后各種波長的X射線按不同的布拉格角彼此分開,因此如轉動晶體,改變衍射角,同時以兩倍于晶體的轉速轉動計數器,就可以依次測量出各種元素所產生的X射線波長和強度,...
DNA探針(DNA probe)是**常用的核酸探針,為長度在幾十到幾百甚至上千堿基對的單鏈或雙鏈DNA,用特殊示蹤劑(如同位素、酶或有色基團)進行標記;在適當的pH值、溫度和離子強度下,DNA探針利用分子的變性、復性以及堿基互補配對的高度精確性,能與待測樣本中互補的非標記單鏈DNA或RNA以氫鍵結合(雜交),形成雙鏈復合物(雜交體)。雜交體的穩定性取決于兩條單鏈核苷酸之間的互補程度。在嚴格的條件下(高pH值、高溫、低離子強度),不完全匹配的雜交體的兩鏈將會解離,而完全匹配的雜交體將保持雙鏈。將未配對結合的探針洗去后,可用放射自顯影或酶聯反應等檢測系統檢測雜交反應結果。(1)電子光學系統。電子...
細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因。各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫。然后用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。將此重組質粒標記后作探針進一步鑒定,亦可經DNA序列分析鑒定其基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。由分光晶體所分散的單一波長X射線被X射線檢測器接受,常用的檢測器一般是正比計數器。普陀區標準探針品牌電子探針...
電子探針分析是指以聚焦的高速電子來激發出試樣表面組成元素的特征X射線,對微區成分進行定性或定量分析的一種材料物理試驗,又稱電子探針X射線顯微分析。電子探針分析的原理是:以動能為10~30千電子伏的細聚焦電子束轟擊試樣表面,擊出表面組成元素的原子內層電子,使原子電離,此時外層電子迅速填補空位而釋放能量,從而產生特征X射線。電子探針的功能主要是進行微區成分分析。它是在電子光學和X射線光譜學原理的基礎上發展起來的一種高效率分析儀器。其原理是用細聚焦電子束入射樣品表面,激發出樣品元素的特征x射線,分析特征X射線的波長(或特征能量)即可知道樣品中所含元素的種類(定性分析),分析X射線的強度,則可知道樣品...
(1)電子光學系統。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發原子發射特征X射線譜過程如下:圍繞原子核運動的內層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補充轟擊出的電子而發生躍遷,在躍遷過程中釋放出能量,即發射出X射線。(2)X射線譜儀。測量各種元素產生的X射線波長和強度,并以此對微小體積中所含元素進行定性和定量分析。特征X射線圖像顯像管的原理是:X射線束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線分光光度計的彎曲晶體上),經衍射后各種波長的X射線按不同的布拉格角彼此分開,因此如轉動晶體,改變衍射角,同時以兩倍于晶體的轉速轉動計數器,就可以依次測量出各種元素所產生的X射線波長和強度,...
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚酶活性,使32P標記的互補核...
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚酶活性,使32P標記的互補核...
探針DNA克隆的篩選也可采用血清學方法,所不同的是所建DNA文庫為可表達性,克隆菌落或噬斑經裂解后釋放出表達抗原,然后用來源細菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆,所得到多個陽性克隆再經其它細菌的抗血清篩選,***只與本細菌抗血清反應的表達克隆即含有此細菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質,然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據這一序列合成一套寡核苷酸探針。光學顯微鏡目測系統。用以準確選擇需要分析的區域,并作光學觀察...
安全**介紹,WiFi探針盒子確實可以通過技術手段獲取個人信息,用戶為避免信息泄露,可以在出門后關閉手機連接WiFi的功能,并不要在一些不合規的APP上提供真實個人信息。律師表示,利用探針盒子獲取他人手機號等隱私信息的行為涉嫌侵犯他人隱私,可能面臨民事侵權責任及治安管理處罰責任。實現原理1. WiFi信道掃描工具WiFi探針實現原理示意圖這種神秘的Wi-Fi探針,實際是“WiFi信道掃描工具”。市面上的WiFi有2.4G、5G兩個頻段,每個頻段有不同的信道劃分,Wi-Fi探針設備通過在各個信道被動監測,采集周圍的數據幀內容,發現周邊手機、筆記本、路由器等無線設備,從而滿足客流統計、精細營銷等需...
體外轉錄技術不斷完善,已相繼建立了單向和雙向體外轉錄系統。該系統主要基于一類新型載體pSP和pGEM,這類載體在多克隆位點兩側分別帶有SP6啟動子和T7啟動子,在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以進行RNA轉錄,如果在多克隆位點接頭中插入了外源DNA片段,則可以此DNA兩條鏈中的一條為模板轉錄生成RNA。這種體外轉錄反應效率很高,在1h內可合成近10μg的RNA產生,只要在底物中加入適量的放射性或生物素標記的NTP,則所合成的RNA可得到高效標記。該方法能有效地控制探針的長度并可提高標記物的利用率。探針卡是一種測試接口,主要對裸芯進行測試,通過連接測試機和芯片,通過傳輸信號對芯片參...
測試探針,K-50-QG 無線路由器測試,是應用于電子測試中測試PCBA的一種測試連接電子元件。測試探針的種類有PCB探針、ICT功能測試探針(汽車線束測試探針、電池針、電流電壓針、開關針、電容極性針、高頻針)、BGA測試探針等。測試探針根據產地不同又分為美國QA探針、美國ECT探針、美國IDI探針等,德國INGUN探針,德國PTR探針等,韓國LEENON探針,中國臺灣CCP中國探針,中國臺灣UC佑傳探針等。測試探針的質量主要體現在材質、鍍層、彈簧、套管的直徑精度及制作工藝上。測試探針分三種,而國內的產品其材質很多用進口材質。 [1]后期生產的儀器,可作X射線背散射照相、照相。閔行區品牌探針維...
該系統為電子探針分析提供具有足夠高的入射能量,足夠大的束流和在樣品表面轟擊殿處束斑直徑近可能小的電子束,作為X射線的激發源。為此,一般也采用鎢絲熱發射電子槍和2-3個聚光鏡的結構。 為了提高X射線的信號強度,電子探針必須采用較掃描電鏡更高的入射電子束流(在10-9-10-7A范圍),常用的加速電壓為10-30 KV,束斑直徑約為0.5μm。電子探針在鏡筒部分與掃描電鏡明顯不同之處是由光學顯微鏡。它的作用是選擇和確定分析點。其方法是,先利用能發出熒光的材料(如ZrO2)置于電子束轟擊下,這是就能觀察到電子束轟擊點的位置,通過樣品移動裝置把它調到光學顯微鏡目鏡十字線交叉點上,這樣就能保證電子束正好...
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內、原子序數4以上的所有元素;但是對原子序數小于12的元素,其靈敏度較差。常規分析的典型檢測相對靈敏度為萬分之一,在有些情況下可達十萬分之一。檢測的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進行點、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對原子序數高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對精度優于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學與電子光學技術相結合而產生的。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺電子探針儀。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結構上有許多共同處...
DNA探針是**常用的核酸探針,指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針?,F已獲得DNA探針數量很多,有細菌、病毒、原蟲、***、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的,如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。以細菌為例,分子雜交技術用于細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要準確的多,是細菌分類學的一個發展方向。加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。1953年前蘇聯制成了X射線微區分析儀,以后英、美等國陸續生產。崇明區質量探針推薦...