透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區別在于檢測電子類別，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時會發生散射，捕獲并檢測散射的電子，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質會對電鏡結果造成影響；另外樣品的準備階段比較復雜，不適合進行大量快速的測量；而且由于樣本經過了干燥、固定以及冷凍等預處理和制備過程，對生物樣本的結構會造成一定的破壞，從而影響觀察的效果，無法準確測量外泌體濃度。外泌體產生相關的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。外泌體機制研究套路

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數據不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。乳液提取試劑盒方法外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。

細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及瘤子診療領域、醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域；臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。

為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀？答：這種問題通常有三種可能性，其一：使用的細胞上清或者血清量太低，從而造成了這樣的結果。其二：使用了不透明的超速離心管，一般來說外泌體產量都比較小，所以凡是不透明的管子，基本都是比較難見到明顯沉淀的，可以當做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角轉。部分品牌離心機的角轉管壁粘附性比較低，超離結束沒多久沉淀就會滑落下去，所以請在離心結束時趕緊去收樣。外泌體的角色：1、外泌體發揮功能并一定需要受體細胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內通路。2、外泌體的角色之一：細胞-細胞通訊，比如抗原遞呈。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。

外泌體遞送藥物的優勢：許多新的候選藥物（例如蛋白質和核酸）在體內環境中高度不穩定，對診療結果的效果提出了重大挑戰。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統相關的問題，外泌體作為“自然的遞送系統”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產物，通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細胞的吞噬作用或降解，還可以在體內長時間循環，保持效果。其中，外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經系統是外泌體遞送藥物的一個明顯優勢。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。外泌體作為蛋白質的藥物遞送載體。海洋生物外泌體tmt

外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合，從而活躍細胞內的信號通路。外泌體機制研究套路

外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白（包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。外泌體發揮功能：將細胞或組織中多余的或者有害的分子排除，這為研究生物標志物提供了可能。外泌體機制研究套路

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