蛋白質(zhì)錯誤折疊和聚集與阿爾茨海默病、帕金森病等密切相關(guān)。均相化學(xué)發(fā)光方法可用于監(jiān)測聚集過程。例如,將待研究的蛋白(如β-淀粉樣蛋白、α-突觸蛋白)分別與化學(xué)發(fā)光供體(如魯米諾衍生物)和受體(如熒光染料或淬滅劑)標(biāo)記。當(dāng)?shù)鞍滋幱趩误w狀態(tài)時,兩者距離較遠(yuǎn),信號弱;當(dāng)發(fā)生聚集時,不同標(biāo)記的分子被納入同一聚集體,供體與受體靠近,通過CRET或淬滅效應(yīng)導(dǎo)致信號特征改變。該方法可實時監(jiān)測聚集動力學(xué),并用于篩選能抑制聚集的小分子化合物。均相化學(xué)發(fā)光對檢測環(huán)境有什么特殊要求?天津診斷試劑均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別

GPCR是比較大的藥物靶點家族,其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對于配體結(jié)合競爭實驗,可采用TR-FRET,將受體標(biāo)記供體,配體標(biāo)記受體。對于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后,內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體??贵w結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術(shù)被檢測,信號強度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動劑/拮抗劑的高通量篩選。湖北POCT產(chǎn)品均相發(fā)光解決方案與傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光技術(shù)相比,均相化學(xué)發(fā)光的優(yōu)勢體現(xiàn)在?

除了基于熒光的能量轉(zhuǎn)移,均相檢測也可利用化學(xué)發(fā)光能量轉(zhuǎn)移(CRET)。在CRET中,供體是化學(xué)發(fā)光反應(yīng)(如魯米諾-過氧化物酶反應(yīng))產(chǎn)生的激發(fā)態(tài)分子,其發(fā)出的光能直接激發(fā)鄰近的熒光受體發(fā)出更長波長的光。通過設(shè)計使受體標(biāo)記在結(jié)合事件的另一方,即可實現(xiàn)均相檢測。電化學(xué)發(fā)光(ECL)也可用于均相模式。例如,將三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記在一方,另一方標(biāo)記上能夠在其電極氧化還原循環(huán)中起共反應(yīng)物作用的物質(zhì)(如三丙胺)。當(dāng)兩者因生物識別事件靠近時,電化學(xué)觸發(fā)的高效ECL反應(yīng)得以發(fā)生,產(chǎn)生強信號。這些方法進一步拓展了均相發(fā)光的技術(shù)邊界,提供了更多樣化的信號輸出選擇。
在藥物安全性評價早期,評估化合物的遺傳毒性至關(guān)重要。傳統(tǒng)的細(xì)菌回復(fù)突變試驗(Ames試驗)周期較長。一些基于哺乳動物細(xì)胞的均相化學(xué)發(fā)光遺傳毒性篩選方法被開發(fā)出來。例如,使用工程細(xì)胞系,其中DNA損傷響應(yīng)元件(如p53響應(yīng)元件)調(diào)控著熒光素酶報告基因的表達。當(dāng)化合物引起DNA損傷時,會活化報告基因,產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。這類方法能在幾天內(nèi)完成對大量化合物的初步遺傳毒性風(fēng)險評估,作為Ames試驗的高通量預(yù)篩選工具,有助于早期淘汰有風(fēng)險的候選分子,節(jié)約研發(fā)成本。浦光生物凍干試劑,靈敏度高,特異性強,實驗結(jié)果更可靠!

熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是均相發(fā)光技術(shù)中應(yīng)用比較多方面的信號產(chǎn)生機制之一。其原理是:當(dāng)一個熒光基團(供體,Donor)的發(fā)射光譜與另一個熒光基團或淬滅基團(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時,供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉(zhuǎn)移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標(biāo)記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當(dāng)目標(biāo)分子存在并促使這對生物分子結(jié)合時,供體與受體被拉近,發(fā)生有效的FRET,導(dǎo)致供體熒光淬滅,受體熒光增強(如果受體是熒光團)。通過監(jiān)測供體與受體熒光強度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標(biāo)分析物。浦光均相發(fā)光檢測試劑盒,操作簡便,快速獲得可靠結(jié)果!廣東均相發(fā)光免疫分析
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自身免疫病的診斷常依賴于檢測患者血清中的特異性自身抗體。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)為此提供了高通量、自動化的解決方案。例如,可以將已知的自身抗原(如dsDNA、ENA蛋白)包被在供體微珠上,患者血清中的自身抗體如果存在,則會與抗原結(jié)合。然后加入標(biāo)記有受體(如熒光標(biāo)記的抗人IgG抗體)的受體微珠或試劑,形成“抗原-自身抗體-抗人IgG”復(fù)合物,從而拉近供受體產(chǎn)生信號。這種方法可以實現(xiàn)多種自身抗體的同步檢測,快速輔助臨床診斷。天津診斷試劑均相發(fā)光與普通發(fā)光的區(qū)別