免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能檢測不到低親和力和瞬間的相互作用：低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質之間的相互作用可能檢測不到，這可能導致某些重要的相互作用被遺漏。不能確保直接相互作用：免疫共沉淀不能保證沉淀的蛋白復合物是由直接相互作用的兩種蛋白組成。兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用。靈敏度限制：免疫共沉淀的靈敏度不如某些其他技術，如親和色譜，這可能影響到對低豐度蛋白或微弱相互作用的研究。樣本純度要求高：如果將蛋白復合物直接進行質譜分析，需要得到較高純度和濃度的蛋白復合物樣品，這并非易事，并且成本較高。對抗體要求高：用于免疫共沉淀的抗體不是總是與操作相合適，與Western blotting或者 ELISA相比容易出現假陽性反應。免疫共沉淀法可信度高，可發現新蛋白搭檔，但存局限，需結合其他方法驗證。湖北免疫共沉淀CoIP
免疫共沉淀CoIP實驗，細胞的收集及裂解方法如下：
收集2E7個細胞樣品，加入PBS洗滌細胞，離心后棄上清收集細胞沉淀。
準備500μl預冷的CellLysisBuffer,分別加入5μlProteaseInhibitor、5μlPMSF，混勻后加進細胞沉淀中吹打均勻，冰上孵育30min，期間渦旋混勻幾次。
4℃,12000rpm離心10min，取上清，進行蛋白濃度測定及后續實驗。廣州基云生物，在IP互作組檢測和關鍵機制分子篩選驗證領域，具有豐富的經驗，助力您的互作機制研究，歡迎垂詢合作。 北京互作機制CoIP-MS檢測蛋白質與蛋白質分子互作實驗方法介紹。
Co-IP（免疫共沉淀）實驗操作的要點。1.細胞裂解：確保采用溫和的裂解條件，以保持細胞內存在的蛋白間相互作用。使用非變性裂解液進行裂解和洗滌。2.抗體固定：選擇經過驗證的抗體，以減少假陽性結果。注意抗體與緩沖液的比例，避免抗體稀釋過度或過多。3.抗體結合：將抗體與樣品混合，確保抗體與目標蛋白充分結合。4.磁珠或瓊脂糖添加：將抗體固定的磁珠或瓊脂糖加入混合物中，使其與抗體-蛋白復合物結合。5.沉淀：通過磁珠或瓊脂糖的沉降，分離出蛋白復合物。6.洗脫：使用洗脫緩沖液將蛋白質復合物從磁珠或瓊脂糖上洗脫下來。7.增加洗脫之前的洗滌次數或在免疫共沉淀緩沖液中加入Triton X-100，以降低非特異性結合。遵循這些操作要點，可以確保Co-IP實驗的準確性和可靠性，從而得到準確的蛋白質相互作用結果。
CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：
互作蛋白篩選和驗證：數據分析以非標定量信號強度（LFQintensity和FC>10）作為強陽篩選，以文獻查閱，功能匹配，批量CoIP-WB驗證，提高驗證成功率。理想CoIP-MS結果的蛋白定量都到超過1000種蛋白。其中絕大部分蛋白為非特異結合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信號強度和差異倍數作為參考（相對強信號和差異），分析實驗組中明顯定量較高且差異較大的蛋白，作為重要候選蛋白。同時對重要候選蛋白進行STRING互作分析，文獻分析，目的蛋白功能匹配分析，選擇Top的4-5個蛋白進行CoIP-WB驗證，提高CoIP-WB成功率。 Co-IP外源檢測引入外源蛋白驗證互作，敏感度高但需嚴控條件，結合內源檢測更準確！
Co-IP實驗原理主要基于抗原-抗體特異性結合以及蛋白質-蛋白質相互作用。具體來說，當細胞在非變性條件下被裂解時，細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用會被保留下來。實驗中，利用靶蛋白的特異性抗體與靶蛋白結合形成復合物，然后通過免疫反應將復合物與固定在固相支持物（如瓊脂糖珠或磁珠）上的親和劑（如Protein A/G）結合。經過一系列的洗滌步驟后，可以去除非特異性結合的蛋白質，將目標蛋白質及其相互作用的蛋白質富集在固相支持物上。通過電泳、質譜分析等技術對富集的蛋白質進行分析，從而鑒定和定量相互作用的蛋白質。Co-IP（免疫共沉淀）技術應用場景。天津互作機制CoIP-MS
Co-IP技術廣泛應用于生物醫學、藥物研發、蛋白質組學等領域，助力科研人員探索生命奧秘！湖北免疫共沉淀CoIP
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。湖北免疫共沉淀CoIP