免疫共沉淀與免疫沉淀技術所使用的原理與方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，對靶蛋白的結合與沉淀由另一個與之發生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基礎上，通過進一步與其它技術的結合，如聚丙烯酰胺凝膠電泳，還可進一步對靶蛋白的的分子量等特性進行鑒定。

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應，對某個特定蛋白純化富集的方法，主要過程包括捕獲和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實驗的基礎上進行的擴展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復合物的中已知或未知的蛋白組分。其原理是基于抗體與抗原（靶蛋白）之間的特異性結合，此時如果樣品溶液中存在能與靶蛋白相互作用的目的蛋白，會一同被拉下來，隨后利用SDS-PAGE，WesternBlot等方法對得到的目標蛋白進行分析，進而證明兩者間的相互作用。

Co-IP內源檢測需注意抗體選擇、實驗條件、樣本處理及驗證，確保結果準確可靠！湖北免疫沉淀CoIP WB檢測

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）技術的缺點主要包括以下幾個方面：抗體特異性要求：IP-WB技術對抗體的特異性要求極高。如果抗體特異性不強，可能會導致非特異性結合，增加背景噪聲，影響結果的準確性。低豐度蛋白檢測難度：由于IP-WB技術的靈敏度限制，對于低豐度的蛋白質相互作用，可能難以檢測到。操作復雜性：IP-WB技術涉及多個步驟，包括樣品制備、免疫沉淀、電泳分離和Western Blot檢測等，操作相對復雜，需要一定的實驗經驗和技能。結果解讀難度：Western Blot結果可能受到多種因素的影響，如蛋白表達水平、抗體親和力等，結果解讀可能具有一定的難度。雖然IP-WB技術存在一些缺點，但通過選擇特異性強的抗體、優化實驗條件、提高實驗技能等方法，可以很大程度地減少這些缺點對實驗結果的影響。湖北免疫沉淀CoIP WB檢測Co-IP技術可靠，但需注意潛在限制與影響因素，綜合驗證確保準確性！

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：

互作蛋白篩選和驗證：數據分析以非標定量信號強度（LFQintensity和FC>10）作為強陽篩選，以文獻查閱，功能匹配，批量CoIP-WB驗證，提高驗證成功率。理想CoIP-MS結果的蛋白定量都到超過1000種蛋白。其中絕大部分蛋白為非特異結合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信號強度和差異倍數作為參考（相對強信號和差異），分析實驗組中明顯定量較高且差異較大的蛋白，作為重要候選蛋白。同時對重要候選蛋白進行STRING互作分析，文獻分析，目的蛋白功能匹配分析，選擇Top的4-5個蛋白進行CoIP-WB驗證，提高CoIP-WB成功率。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）實驗在生物學和醫學研究中具有廣泛的應用范圍。以下是其主要的應用領域：1.蛋白質相互作用研究（檢測蛋白質相互作用/確定蛋白質復合物的成員）；2.細胞信號傳導研究；3.蛋白質功能和結構研究；4.疾病機制研究；5.其他應用：蛋白純化，蛋白質翻譯后修飾研究。綜上所述，免疫共沉淀實驗在蛋白質相互作用研究、細胞信號傳導研究、蛋白質功能和結構研究以及疾病機制研究等多個領域都具有廣泛的應用價值。Co-IP揭示蛋白互作，驗證復合物形成，探究信號通路，助力蛋白研究！

CoIP-Mass應用場景：CoIP-Mass：用于構建目的蛋白的蛋白互作組數據，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作組差異。CoIP-WB：用于驗證目的蛋白和候選蛋白的相互作用關系，或用于不同遺傳背景/實驗條件下的互作變化。

CoIP-Mass和CoIP-WB技術價值：（1）蛋白質相互作用數據是機制研究的重要基礎內容，體現機制研究的嚴謹性，能明顯提高臨床基礎類研究文章的檔次。（2）細胞內蛋白互作處于動態變化過程，在不同條件下可發生動態變化，蛋白動態互作組檢測，是蛋白互作機制的亮點。（3）蛋白互作，往往是結構域或部分關鍵區段的互作，可通過蛋白區段拆分，進一步明確互作的結構域，提升機制研究的高度，為靶點轉化提供關鍵切入點。 Co-IP高特異靈敏，適用多樣本，兼容質譜，操作簡便，優勢大！陜西免疫共沉淀檢測CoIP

Co-IP技術簡便、特異、靈敏，是探索蛋白質相互作用和疾病機制的重要工具！湖北免疫沉淀CoIP WB檢測

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：

試驗設計：盡量進行試驗組別設計和進行生物學重復檢測，提高后續驗證的陽性率。常規過表達單組（AbIPvsIgGIP）；動態互作組學（實驗組vs對照組vsIg組）。根據目的設計適當的生物學重復。如果后續以CoIP-Mass數據進行互作組標準分析，則需要3-4組生物學重復；如果后續以尋找關鍵互作蛋白，進行機制深入研究，則建議1-2次生物學重復。經驗顯示單次重復假陽性率90%。

蛋白表達和細胞量：細胞用量要求大(2-10e7細胞量），建議不少于5e7（金標準：320g離心細胞量50μl，保障項目用量）。低表達蛋白，建議使用過表達組進行檢測。蛋白表達可根據WB結果或初步根據數據庫判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。 湖北免疫沉淀CoIP WB檢測