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廣東FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學

來源: 發布時間:2024-07-29

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同,Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1和IgA2m1,產生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長,因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時間為過夜(16-18小時),并且由于酶的特異性,沒有過度消化的風險。該酶在pH值為6.0至8.0時具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可產生活性。活性為37°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在1000個單位的小瓶中,用于消化1mgIgA1和IgA2m1。可用于抗體高階結構(HOS)結晶和NMR研究、雙抗或多抗的表征、單價結合研究或完整Fc聚糖分析。廣東FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學

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Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性,包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此,FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區域的突變敏感,并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,與 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。甘肅FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學zhiliao性抗體和基于IgG的生物制藥的結構表征和監測關鍵質量屬性。

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大多數zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架,雙特異性和多特異性形式的開發正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,這需要優化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性,它在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1,并產生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性,通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實現了完全消化,包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗證了其在生物制藥開發中的用途。

抗體 Fc 糖基化譜是一種重要的 CQA,因為它會影響療效、和免疫原性。因此,需要從早期開發、工藝開發到質量控制和批量放行的整個過程對Fc聚糖譜進行監測。傳統的分析方法基于對游離的聚糖進行熒光標記,然后通過HILIC-HPLC或CE進行分析,這需要多步驟的樣品制備方案,這需要大量的時間和資源。使用Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb,然后使用LC-MS進行中級分析,為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的替代方法。如上所示,它很容易實現自動化,以提高通量并降低處理錯誤的風險。能夠在中級表征中并行快速自動酶解多種抗體。

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為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR(IdeS)。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優勢是速度。在大多數IgG上,您可以在短短30分鐘內生成F(ab’)2和Fc/2片段,這一速度簡化了方法開發,并允許快速有效的中層表征,使客戶能夠在不比做完整質量實驗長太多的時間內獲得更多關于分子的信息。Genovis發現更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容(更多信息)。Genovis已經測試了PBS和150mM醋酸銨,pH7,結果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而,緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC(IdeS)色譜柱上的保留,并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優化。為了降低度拉糖肽復雜性,使用GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,并用DTT還原鏈間二硫鍵。甘肅FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis提供具有低水平內du素的FabRICATOR (IdeS)凍干。廣東FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 (2D-NMR) 之后,可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關鍵質量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程,是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇,在海報“FabALACTICA產生純和均相的mAb亞基,促進2D-NMR波譜分析”中進行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質量信號和光譜分辨率導致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結構變化、氧化和非氧化樣品之間的差異,并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。廣東FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學

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