Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。這些微球能夠在中級表征工作流程中并行快速自動酶解多種抗體。它們專為自動化平臺而設計，但在無法實現自動化的情況下，在振動臺上的表現同樣出色。酶切消解后，樣品可直接轉移到LC-MS的自動進樣器進行快速色譜分析，或轉移到其他分析方法進行分析。自動平行抗體酶切和亞基生成允許處理與克隆選擇、工藝開發和潛在生物制藥穩定性研究相關的大量樣品。自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險，并提高通量。如mAb在生產或儲存過程中的氧化，它可能會影響zhiliao產品的質量。江蘇IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說，Fab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1，在足夠溫和的還原條件下保留鏈內和鏈間二硫鍵，從而產生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白，消化通常在鉸鏈上方獲得，但融合伴侶的結構和氨基酸序列可能導致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖，Fc 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時，并通過 HPLC 進行分析。湖南GingisREXIdeS蛋白酶使用GlySERIAS固定化消化融合蛋白得到均質Fc/2。

如果您想分析單克隆抗體或單克隆抗體分子，現在有了Genovis的一些新產品（IgA酶，IgM酶），其他的模式和分子形式（IdeS高通量的產品形式）來測定和監測許多不同的CQA，Genovis可以緩解使用不同分析方法時可能出現的瓶頸。 生產大量的樣品當然很好，但如果分析團隊不能足夠快地處理它們，那就沒有什么意義了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法，當然這些方法要快速，而且可能易于自動化。 這正是我們所能提供的，這使Genovis能夠支持更多不同功能的客戶。

樣品制備的條件可能會在樣品中誘發偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進行質譜分析。如果可能的話，避免多個步驟并在一鍋反應中進行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進行了評估。數據顯示，GingisREX在6M時耐受尿素，吐溫高達1%，但活性在0.1%時受到SDC的負面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應，以同時消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個 scFv 融合，形成一個雙特異性分子，其中一個 scFv 靶向細胞毒性 T 細胞，另一個靶向Ai癥抗原。該蛋白質由四個蛋白質結構域組成，兩個 scFv 均由 VL 和 VH 區域組成，總共由三個柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質譜法進行產品質量監測構成挑戰，因為標準MS儀器可能無法提供蛋白質的單同位素分辨率。可用于抗體高階結構（HOS）結晶和NMR研究、雙抗或多抗的表征、單價結合研究或完整Fc聚糖分析。

作為免疫系統的重要組成部分，IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比，IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域，使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在，A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸（P）和纈氨酸（V）之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域，但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸（R）殘基取代，因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標準方法，并為產品質量屬性提供特定領域的信息。江蘇IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

該酶在pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性。江蘇IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

蛋白酶用于生成肽，用于質譜分析蛋白質。這些應用包括蛋白質組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影，傳統的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質 C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導致序列覆蓋率增加。質譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質量的數據集和避免復雜的數據解釋至關重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數據證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。江蘇IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切