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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-05-30

DNA探針是**常用的核酸探針,指長(zhǎng)度在幾百堿基對(duì)以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現(xiàn)已獲得DNA探針數(shù)量很多,有細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)、***、動(dòng)物和人類(lèi)細(xì)胞DNA探針。這類(lèi)探針多為某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的,如細(xì)菌的毒力因子基因探針和人類(lèi)Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴(lài)于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。以細(xì)菌為例,分子雜交技術(shù)用于細(xì)菌的分類(lèi)和菌種鑒定比之G+C百分比值要準(zhǔn)確的多,是細(xì)菌分類(lèi)學(xué)的一個(gè)發(fā)展方向。加之分子雜交技術(shù)的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。近年來(lái)半導(dǎo)體制程技術(shù)突飛猛進(jìn),超前摩爾定律預(yù)估法則好幾年,現(xiàn)階段已向7奈米以下挺進(jìn)。徐匯區(qū)品牌探針維修價(jià)格

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用此探針在DNA文庫(kù)中篩選,陽(yáng)性克隆即是目標(biāo)蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細(xì)胞和原核細(xì)胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內(nèi)含子序列,而原核則沒(méi)有。因此,真核基因組DNA探針用于檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優(yōu)點(diǎn)有下面三點(diǎn):①這類(lèi)探針多克隆在質(zhì)粒載體中,可以無(wú)限繁殖,取之不盡,制備方法簡(jiǎn)便。②DNA探針不易降解(相對(duì)RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標(biāo)記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移,隨機(jī)引物法,PCR標(biāo)記法等,能用于同位素和非同位素標(biāo)記。青浦區(qū)挑選探針按需定制主要用來(lái)分析固體物質(zhì)表面的細(xì)小顆粒或微小區(qū)域,小范圍直徑為1μm左右。

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電子探針儀鏡筒部分的構(gòu)造大體上和掃描電子顯微鏡相同,只是在檢測(cè)器部分使用的是X射線(xiàn)譜儀、專(zhuān)門(mén)用來(lái)檢測(cè)X射線(xiàn)的特征波長(zhǎng)或特征能量,以此來(lái)對(duì)微區(qū)的化學(xué)成分進(jìn)行分析。因此,除專(zhuān)門(mén)的電子探針儀外,有相當(dāng)一部分電子探針儀是作為附件安裝在掃描電鏡或透射電鏡鏡筒上,以滿(mǎn)足微區(qū)組織形貌、晶體結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分三位一體同位分析的需要 [1]。用波長(zhǎng)色散譜儀(或能量色散譜儀)和檢測(cè)計(jì)數(shù)系統(tǒng),測(cè)量特征X射線(xiàn)的波長(zhǎng)(或能量)和強(qiáng)度,即可鑒別元素的種類(lèi)和濃度。

探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團(tuán),便于標(biāo)記。特點(diǎn)是比活性高,可達(dá)9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線(xiàn)能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時(shí)間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測(cè)定ELISA方法相似,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,事實(shí)上被標(biāo)記的抗體也稱(chēng)為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標(biāo)記的。1953年前蘇聯(lián)制成了X射線(xiàn)微區(qū)分析儀,以后英、美等國(guó)陸續(xù)生產(chǎn)。

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3 面分析用于測(cè)定某種元素的面分布情況。方法是將X射線(xiàn)譜儀固定在所要測(cè)量的某元素特征X射線(xiàn)信號(hào)的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時(shí)在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線(xiàn)強(qiáng)度調(diào)制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時(shí),先測(cè)得試樣中Y元素的特征X射線(xiàn)強(qiáng)度IY,再在同一條件下測(cè)出已知純?cè)豗的標(biāo)準(zhǔn)試樣特征X射線(xiàn)強(qiáng)度IO。然后兩者分別扣除背底和計(jì)數(shù)器死時(shí)間對(duì)所測(cè)值的影響,得到相應(yīng)的強(qiáng)度值IY和IO,兩者相除得到X射線(xiàn)強(qiáng)度之比KY= IY / IO。 直接將測(cè)得的強(qiáng)度比KY當(dāng)作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,通常還需進(jìn)行三種效應(yīng)的修正。即原子序數(shù)效應(yīng)的修正,吸收效應(yīng)修正,熒光效應(yīng)修正。經(jīng)過(guò)修正,誤差可控制在±2%以?xún)?nèi)。背散射電子圖像系統(tǒng)。青浦區(qū)挑選探針按需定制

電子探針是法國(guó)制成的,是在1949年用電子顯微鏡和X射線(xiàn)光譜儀組合而成。徐匯區(qū)品牌探針維修價(jià)格

探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法,所不同的是所建DNA文庫(kù)為可表達(dá)性,克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達(dá)抗原,然后用來(lái)源細(xì)菌的多克隆抗血清篩選陽(yáng)性克隆,所得到多個(gè)陽(yáng)性克隆再經(jīng)其它細(xì)菌的抗血清篩選,***只與本細(xì)菌抗血清反應(yīng)的表達(dá)克隆即含有此細(xì)菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達(dá)文庫(kù)篩選得到的顯然只是特定基因探針。對(duì)于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì),然后測(cè)定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。徐匯區(qū)品牌探針維修價(jià)格

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