紫外可見分光光度計雖然有好的使用效果,整個使用會非常的精確,不過在對這種設(shè)備安裝時候會對安裝環(huán)境有一定要求的,具體往往表現(xiàn)在以下這些方面:方面一:如果是在實驗室環(huán)境下安裝紫外可見分光光度計設(shè)備的話,不僅*對環(huán)境的溫度和潔凈度情況有一定要求,而且對光核磁場干擾情況也有一定要求;一般環(huán)境溫度儀器要能安裝在干燥房間內(nèi),保持房間溫度要在5-35攝氏度左右,要能夠保證的室內(nèi)濕度不能超過百分之八十五,比較好的濕度要能控制在百分之四十五到百分之六十五之間,如果有條件的話可以進行配備去濕機和溫度計等,當(dāng)室內(nèi)環(huán)境下濕度相對比較大的話還需能在設(shè)備周圍放上一些干燥劑才行。方面二:在安裝紫外可見分光光度計設(shè)備時候,需要去一些無強光干擾和沒有磁場干擾的室內(nèi)進行安裝,尤其需要能夠避免太陽光的直射,如果做不到這些在安裝設(shè)備時候就會造成對設(shè)備的損壞情況發(fā)生,同時在使用紫外可見分光光度計設(shè)備時候也需能夠遠離一些**度的磁場、電場和發(fā)生高頻波的電器設(shè)備,以防止電磁干擾影響準確的使用情況。方面三:在安裝紫外可見分光光度計設(shè)備時候,需要避免在一些存有腐蝕性氣體環(huán)境下進行,有腐蝕的氣體包括有硫化氫、二氧化硫和各種酸霧等。 在安裝紫外可見分光光度計設(shè)備時候,需要去一些無強光干擾和沒有磁場干擾的室內(nèi)進行安裝。食品安全紫外可見分光光度計儀器
分光光度計的簡單原理:分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。核酸的定量:核酸的定量是分光光度計使用頻率比較高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的比較高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實驗并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者的問題。靈敏度越高的儀器,表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。 水質(zhì)紫外可見分光光度計差價儀器的選擇性是指該儀器不受試樣基體中所含其它類物質(zhì)干擾的程度。
日常在使用分光光度計時,是否要經(jīng)常進行儀器波長準確度的檢查?答案是否定的。當(dāng)在日常測定中發(fā)現(xiàn)儀器測定靈敏度下降,這時才應(yīng)進行波長準確度的檢查,**簡易的檢查方法(粗檢)是:儀器開機后,調(diào)節(jié)波長為580nm,在吸收池座的通光道中插入一張白色卡片紙,若能觀察到一長方形的黃色光斑,說明波長準確度屬正常范圍,否則就應(yīng)進行波長校正。當(dāng)儀器經(jīng)過長途搬運、受過機械振動或更換光源燈泡后,必須進行波長準確度的檢查與校正。粗檢同上,其校正方法有:干涉濾光片或鐠釹濾光片校正法、利用氘燈的特征發(fā)射線校正法。具體步驟可參考儀器使用說明書。
發(fā)現(xiàn)測定過程中的一些不良操作不利于儀器的維護、保養(yǎng),使用者應(yīng)盡可能避免。如在儀器的上方進行操作(如倒溶液);拿出來的吸收池(或吸收池架)放在儀器的面板上;同實驗室不同儀器的吸收池混用等。關(guān)于防塵、防潮問題儀器一般都隨機附有一只塑料布罩,不使用時用其罩住整個儀器,這是很好的防塵手段。但發(fā)現(xiàn)很多實驗室里不用附來塑料布罩,而是自己用一塊普通布或做成布罩來覆蓋儀器,防塵效果不如塑料布罩理想。另外,在塑料布罩只放入數(shù)袋防潮硅膠,也能更好起到延長防潮的功效。在防潮時,如果儀器設(shè)有防潮干燥筒的,應(yīng)經(jīng)常檢查,發(fā)現(xiàn)變色立即更換新的或加以烘干再用。長期停用的分光光度計,要定期開機除潮,如每隔一個月通電預(yù)熱半小時,以保持整機呈干燥狀態(tài),并且維持電子元件的性能。 在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測中,紫外可見分光光度法占有較大的比重。
分光光度計使用注意事項1、紫外可見分光光度計在開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。2、筆式PH計測定時,禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上,如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K,要盡可能及時清理干凈。3、比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3~4/5為宜,不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應(yīng)保持比色皿清潔,池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干,切勿用手捏透光面。測定紫外波長時,需選用石英比色皿。4、實驗結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈,倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi),蓋上防塵罩,做好使用登記,得到管理老師認可方可離開。一般連續(xù)光源主要用于分子吸收光譜法。水質(zhì)紫外可見分光光度計對比
因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。食品安全紫外可見分光光度計儀器
紫外可見分光光度計在有機分析中的應(yīng)用分析。利用特征吸收峰法鑒別有關(guān)物質(zhì)利用某些化合物在紫外區(qū)的特征吸收峰,可以判別物質(zhì)。如,氯霉素分子中的硝基是由它的紫外光譜確定的。在紫外區(qū)的298nm和278nm處,氯霉素會出現(xiàn)芳香硝基的特征吸收峰。五元環(huán)酮和羧基酯的紅外光譜特征吸收峰都在1740cm-1附近,因此,用紅外光譜法,難以區(qū)分它們。但是,在紫外光譜中,只有五元環(huán)酮在210nm以上有吸收,因此,可以鑒別。(2)利用紫外光譜譜圖的方法鑒別有機化合物通過對比兩個有機化合物的紫外光譜圖,可以鑒別它們。(3)利用π鍵反應(yīng)減小干擾在紫外可見分光光度計的使用過程中,有時很強的吸收會引起干擾作用,如:有些稠環(huán)化合物對某些波長的吸收就很強,這時,可采用化學(xué),c鍵反應(yīng)去除。例如有機化合物蒽具有三個大冗鍵,在波長252nm處有溝吸收,它的摩爾吸光系數(shù)會對一些在此也有吸收的化合物產(chǎn)生干擾,可讓它與丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder加成反應(yīng)。這個反應(yīng)的結(jié)果,原來三個大π鍵的共軛系統(tǒng)就被破壞,原先很強的吸收就被減弱,干擾就會減小。 食品安全紫外可見分光光度計儀器
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