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細胞上清外泌體融合實驗

來源: 發布時間:2023-12-03

在多細胞生物體內,遠處的細胞可以通過傳遞單個分子或細胞外囊泡(EVs,包括exosomes和microvesicles等)交換信息。該綜述介紹了一些EVs引人注目的功能,以及我們目前對其生理作用認識的局限。盡管有初步研究表明,EVs在體內具有一些生理功能,但EVs的本質特性仍有待進一步澄清。這篇綜述主要關注種瘤細胞和微環境,但類似的結果和挑戰也適用于EVs介導的其他的病理/生理過程。功能神經的能力和完整性需要感覺運動神經元、神經元和神經膠質細胞之間的交互式信息交流。外泌體的異質性可以根據其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區分。細胞上清外泌體融合實驗

細胞上清外泌體融合實驗,外泌體提取試劑盒

通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結合蛋白,可通過與外泌體質膜糖蛋白上的糖鏈結合來改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離。外泌體檢測有報導指出,外泌體內miRNA參與促進血管新生、抗癥性和促進膠原蛋白沉淀等一系列過程。

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通過對28例前列腺ai癥患者和19例正常人尿液外泌體中的miRNA進行深度測序分析,發現兩種miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者組明顯下調,表明尿液外泌體中的特異性miRNA可能作為前列腺ai的新型生物標志物。Khurana等[100]將研究對象由miRNAs擴大至多種類型RNA,通過對慢性腎病患者尿液外泌體中各類RNA進行系統研究,在慢性腎病患者組中識別出30種明顯差異的lncRNAs,表明尿液外泌體中的lncRNAs具有作為慢性腎病早期診斷標志物的潛力。Skotland等的研究則表明尿液外泌體中的脂質能夠作為前列腺ai的新型標志物,3種脂質標志物結合使用能夠有效提高對前列腺ai的診斷靈敏度(93%)和特異性(100%)。

外泌體(exosome)是多種活細胞經過“內吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結構細胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細胞間胞質蛋白、核酸和脂質的轉移載體發揮運輸調控作用,被認為是細胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網織紅細胞分化的過程中被發現,并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細胞間通訊結構在免疫系統中發揮作用后得到了廣fan關注。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發現,外泌體Glypican-1蛋白可有效區分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷、預后預測標志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉化醫學應用也得到了迅速的推進。外泌體可以直接進入受體細胞影響細胞功能。

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目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法,但這些方法混有非常多的雜質,必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩定,不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難,需要盡快開發操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。因此,日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細胞外域與磁珠結合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸(PS)法特異性結合Tim4蛋白和磁珠,再經過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離,提取高純度的完整外泌體。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型。外泌體提取試劑盒成分

有望將外泌體應用在各種疾病醫治上。細胞上清外泌體融合實驗

基于免疫細胞來源的外泌體能夠介導和調節機體對中流的免疫反應,外泌體在中流免疫zhiliao方面的潛力受到廣fan關注。其中樹枝狀細胞產生的外泌體包含大量的MHC-多肽復合物和免疫刺激相關的分子,能夠激huo相關的T細胞,介導體內抗中流應答,在多個臨床試驗中表現出良好的抗中流療效。Morse等考察了樹枝狀細胞外泌體對非小細胞肺ai患者的療效。結果表明,患者對樹枝狀細胞外泌體耐受性良好,1/3患者表現出了對樹枝狀細胞外泌體的T細胞響應,2/4患者自然殺傷細胞活性得以激huo。細胞上清外泌體融合實驗

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