外泌體開始被認為是細胞排出代謝廢物的一種方式，能夠幫助缺乏高效降解能力或位于排泄系統的細胞排出不必要的蛋白質和RNA。近年來，隨著人們對外泌體的深入了解，外泌體的多種生物功能先后被發現。如今外泌體作為一種細胞間交流、傳遞大量的生物功能分子的重要方式日益受到重視。外泌體與受體細胞的信息交流可能通過以下4種途徑實現:(1)外泌體表面膜蛋白質被目的細胞表面的受體識別，從而激huo靶細胞;(2)外泌體在蛋白酶作用下產生的表面膜蛋白質碎片可作為目的細胞表面受體的配體;(3)外泌體脂膜可以與目的細胞膜融合，將蛋白質和RNA等內容物釋放進去，此類膜融合可能改變靶細胞的一些膜特性，例如脂質和膜蛋白質的密度及種類;(4)目的細胞通過胞吞的形式攝入外泌體。神經細胞來源的外泌體含有與神經退行性疾病相關的分子。血液外泌體miRNA芯片

外泌體作為細胞外囊泡的一個亞群,直徑集中于30~150nm。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對稱場流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對樣品進行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對外泌體的破壞,而且可通過增大離心力和延長離心時間提高外泌體產物濃度。但離心力過大或離心時間過長均有可能導致超濾膜或外泌體破裂。此外,超濾法可以和切向流過濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結合進一步提高分離效率。外泌體結構外泌體研究相對困難，需要盡快開發操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞，通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經靶向性處理的外泌體用DiR染料標記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經出現在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。

目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難，需要盡快開發操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。因此，日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細胞外域與磁珠結合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結合Tim4蛋白和磁珠，再經過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離，提取高純度的完整外泌體。外泌體的遺傳分子與肝臟病理息息相關，在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點或分子標志物。

利用蛋白質免疫印跡和酶聯免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一，操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等，內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標志蛋白)或鈣聯結蛋白Calnexin。在酶聯免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。外泌體形成

有關外泌體分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。血液外泌體miRNA芯片

為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題,Wako研發出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture?ExosomeIsolationKitPS）提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細胞通過翻轉酶作用導向細胞膜內側，暴露在外泌體膜外側3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結合4）。基于上述知識，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學醫學系免疫學華山教授共同開發，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。血液外泌體miRNA芯片