外泌體的提取方法：超速離心法，這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過濾離心法，這種操作簡單、省時，不會影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期的準備工作繁雜，比較耗時，量少。外泌體的提取的方式：PS親和法。細胞提取試劑盒

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足。動態(tài)光散射法中散射光強度依賴于顆粒質(zhì)量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果，因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動態(tài)光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數(shù)學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時，為了得到準確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。細胞提取試劑盒NTA技術已被作為外泌體表征手段之一。

瘤在生長過程中會不斷地將外泌體釋放到周圍環(huán)境中去，同時，外泌體能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更長時間，可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術的進步，已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領域，外泌體中存在黑色素瘤標志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關蛋白，且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者，通過檢測MIA和S100B表達水平對黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說，液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來源上的延伸，進一步豐富了檢測手段，而隨著外泌體的不斷揭秘，相信其會在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來越重要的作用。

外泌體是細胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導細胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細胞內(nèi),從而激huo靶細胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細胞的細胞表面受體結合,從而激huo靶細胞;(3)外泌體還可以與靶細胞直接接觸發(fā)生膜融合,導致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉移到目標細胞,從而引起靶細胞的響應。通過介導細胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細胞或髓樣細胞以抑制免疫反應,而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進中流轉移過程中的血管生長和中流細胞遷移。通過壓制或去除這些外泌體，有希望壓制疾病發(fā)生。

外泌體(exosome)是多種活細胞經(jīng)過“內(nèi)吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結構細胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細胞間胞質(zhì)蛋白、核酸和脂質(zhì)的轉移載體發(fā)揮運輸調(diào)控作用,被認為是細胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網(wǎng)織紅細胞分化的過程中被發(fā)現(xiàn),并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細胞間通訊結構在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用后得到了廣fan關注。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發(fā)現(xiàn),外泌體Glypican-1蛋白可有效區(qū)分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷、預后預測標志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉化醫(yī)學應用也得到了迅速的推進。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。外泌體標記示蹤

外泌體被認為是疾病的生物標志物和預后因子，具有重要的臨床診斷和治理意義。細胞提取試劑盒

與干細胞不同的是：干細胞外泌體對受損的微環(huán)境不響應，但它可以通過改變細胞外基質(zhì)，改變受體細胞的轉錄組和蛋白質(zhì)組，來調(diào)節(jié)細胞凋亡，生長，增殖和分化途徑。因此，干細胞外泌體具有減少細胞凋亡、減輕炎癥反應、促進血管生成、抑制纖維化、提高組織修復潛力等重要生物學功能，在調(diào)控組織再生方面存在良好的臨床應用前景。干細胞外泌體的優(yōu)點，體積小：納米級粒子，大小約為細胞的1/200，因此能很好地被人體所利用。免疫反應程度低：外泌體不是細胞，只作為載具，外膜的表層上呈現(xiàn)較少的抗原，免疫系統(tǒng)難識別，對人體影響小。可穿透血腦障壁：體積小加上脂質(zhì)外膜的特性，使其可以通過血腦障壁，抵達腦部組織。細胞提取試劑盒

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