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腹膜透析液外泌體lncRNA測序

來源: 發布時間:2023-03-12

外泌體發現于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結構小體,可由機體內多種細胞如免疫細胞、干細胞、心血管細胞、網織紅細胞、血小板、神經細胞和肉瘤細胞等主動分泌產生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體的大小:外泌體的直徑約30-150nm。腹膜透析液外泌體lncRNA測序

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外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素。杭州細胞上清外泌體外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉運至靶細胞。

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外泌體分離的主要挑戰之一是消除納米級污染物,包括干擾外泌體標志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。盡管如此,它仍難以符合臨床應用所需的標準,主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,產量較低,完整性欠佳且分離純化操作耗時長。其他方法,例如基于聚乙二醇(PEG)的沉淀,磷脂酰絲氨酸親和捕獲,尺寸排阻色譜法和膜親和捕獲,近年來已經出現在特定的應用中,但是只適用于特定場景。近來,非對稱流場-流分離方法已被用于從細胞和瘤子培養基中高分辨率地分選EV亞群,但其通量受到繁瑣的樣品制備程序的影響。單一分析耗時的過程也限制了其普遍的應用。因此,目前亟需開發創新技術以提高外泌體分離純化的效率,純度,產量,速度和耐用性。基于超濾的技術提供了潛在的有前途的替代方法,但它們也有缺點。在切向流過濾中,使進料流平行于多孔膜流動,以避免堵塞。然而,盡管已實現使用切向流過濾從大量條件細胞培養基中濃縮外泌體,但受制于其一次性模塊的成本高,高剪切應力,難以處理小體積樣品等因素而難以應用于臨床分析。

外泌體研究背景:胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結構的囊泡狀小體,主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml,可攜帶核酸、蛋白質質和脂質等,存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實,外泌體可以通過細胞間轉移核酸、蛋白質、脂質等特定物質,發揮特殊的功能。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、腫細胞細胞發生了發展、神經細胞信號轉導過程中都發揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。外泌體的提取的方式:PS親和法。

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外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障(如細胞質膜和血/腦屏障)的能力。這使它們成為理想的診療傳遞分子。外泌體由于其天然的材料運輸特性,固有的長期循環能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體,其適合于遞送各種化學物質,蛋白質,核酸和基因診療劑。(1)外泌體作為小分子的藥物傳遞載體:關于外泌體遞送姜黃素,多巴胺,PTX和DOX等化學診療藥物的報道已有充分文獻記載。(2)外泌體作為蛋白質的藥物遞送載體:已經發現外泌體可遞送多種蛋白質,例如酶,細胞骨架蛋白質和跨膜蛋白質。(3)外泌體作為核酸的藥物遞送載體:研究表明,外泌體天然的可以攜帶遺傳(例如miRNA,siRNA)到靶細胞中,從而在生物學和致病過程中誘導遺傳修飾。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進行研究的主要策略。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體如何提取

需要開發大規模生產質量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。腹膜透析液外泌體lncRNA測序

細胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調節和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞作用、網格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內信號或融合,從而將外泌體內容物沉積到細胞質中。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經涉及醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。腹膜透析液外泌體lncRNA測序

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