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外泌體的提取

來源: 發布時間:2023-03-02

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,并影響細胞外環境和免疫系統反應。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉運至靶細胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細胞因子、細胞受體、脂質以及不同的核酸,如miRNA和環狀RNA。外泌體可以通過多種方法給藥,靜脈內給藥是較常用的途徑。外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。外泌體的提取

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外泌體是包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30–150nm),由所有體外和體內細胞持續分泌。由于人體內復雜的功能,包括細胞間通訊和信號轉導,外泌體正在改變研究。這些細胞外囊泡正在生長,這既是為了了解其生物學功能,也是為了將其用于實際應用,如無創診斷和高級調理開發。Dynabeads提供一系列外泌體分離產品和工具,用于表征和分析其RNA和蛋白質含量,以及體外和體內追蹤,以幫助您進一步了解這些迷人的外泌體。超速離心方案可能冗長乏味且耗時的。您可使用靈活且可擴展的總外泌體分離試劑從細胞培養基或任何體液中即刻分離完整的外泌體。這些試劑及其隨附的方案是多種試驗的理想選擇,包括處理少量樣本和處理多個樣本。腦脊液外泌體粒徑檢測提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態學(電子顯微鏡技術)、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的。

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血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物,也可以進行機理研究?首先,研究人員將慢性淋巴瘤(CLL)患者分為2個亞組:疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白組,發現S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達,可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步,研究人員通過生信分析發現進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質主要與炎癥和氧化應激有關,而NF-κB通路正是承接此效應的關鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中,證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調,進一步活躍NF-κB通路。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物,并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調控,不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路,促進CLL進展的特殊機理。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。

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外泌體的相關成分:1、外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動,參與包括跨膜信號轉導、物質內吞、脂質及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產生相關的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質進行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進行主動包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。血漿提取試劑盒服務

外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經退行性疾病的發病機理。外泌體的提取

細胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調節和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞作用、網格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體的內容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內信號或融合,從而將外泌體內容物沉積到細胞質中。外泌體的提取

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